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最常用的超离心分离法的方法介绍

2022.10.04

  最常用的有:

  ①沉降速度法:用超离心法,增加蛋白质溶液的离心强度,当溶液所含蛋白质颗粒大小和形状都相同时,这些颗粒以相同的速度移向管底,并形成清楚的界面;当溶液中有多种大小不同的蛋白质颗粒时,就会有几个界面,用特殊的光学系统可以观察到沉降界面,从而判断出蛋白质的沉降速率。当沉降界面以恒速移动时,单位离心场里的沉降速度称为沉降常数,用S表示。用超离心法可以测出S,然后用一个公式即可计算出蛋白质的大小及分子量。

  ②沉降平衡法:当一个含多种蛋白质的混合物在离心速度不太高的情况下,一方面由于重力作用,按蛋白质分子的大小以不同的速度向器底沉降,另一方面蛋白质颗粒又从高浓度向低浓度扩散,在沉降和扩散的相互作用下,可使蛋白质颗粒最后达到平衡,称沉降平衡。蛋白质颗粒在溶液中呈现稳定的连续分布即可形成某种浓度梯度,通过测定这种浓度分析就可以求出蛋白质的大小和分子量。

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