细胞株STR鉴定(Cell Line STR Authentication) FAQs (2)
1.细胞株进行STR鉴定时，进行比对、参考的数据库有哪些？
答:国外数据库有ExPASy (Cellosaurus) 、ATCC (American type culture collection) 、DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikrorganismen and Zellkulturen) 、JCRB (Japanese Collection of Research Bioresources) 等；国内的数据库可以参考国家实验细胞资源共享服务平台 (NICR) 。
2.目前已知有的细胞或是错误标记 (misidentified) 或被交叉污染 (cross-contaminated) ，从源头上已变成问题细胞 (Problematic cell line) 。那有没有数据库或者细胞库能够查阅这类细胞，从而避免在实验中使用？
答：国际细胞系认证委员会 (International Cell Line Authentication Committee, ICLAC) 建立的 The Register of Cross-Contaminated/Misidentified Cell Lines 数据库，可以为科研人员提供相应帮助。另外，ExPASy数据库对于此类问题细胞都做出了明确的文字说明，也可以提示科研人员避免使用。
3.是否有关于细胞株鉴定的标准或指南？
答：有相关的标准或指南。例如ICLAC、欧洲认证细胞培养物收藏中心 (EuropeanCollection of Authenticated Cell Cultures, ECACC) 这些机构都建立了关于细胞株鉴定的建议和指南。ATCC的标准发展组织 (Standards Development Organization, SDO) 颁布了ASN-0002标准《Authentication of Human Cell Lines: Standardization of STR Profiling》。
4.采用STR分型技术鉴定细胞株时，需要比对多少个位点才能确认细胞身份？
答：根据ANSI/ATCC ASN-0002标准，采用STR分型对细胞株进行鉴定时，比对8个核心位点以及Amelogenin位点即可确认细胞身份。这8个核心位点包括D5S818、TPOX、CSF1PO、TH01、vWA、D7S820、D16S539及D13S317。而第三方检测机构的试剂盒检测位点可能不止这9个位点，苏州鉴达 (Genetic Testing Biotechnology, GTB)的人源细胞试剂盒可以检测多达23个位点。
5. 采用STR分型技术鉴定细胞株时，如何判定细胞株是否存在交叉污染？
答：以人源细胞为例，由于人为二倍体，因此正常人源细胞株的STR位点峰图，为单峰（纯合子）或双峰（杂合子）。当分型图谱中，如果多个位点同时出现多等位基因（一般为3峰或4峰）时，则考虑细胞株存在交叉污染。
6.长时间传代，细胞株会发生变化吗？
答：随着不断传代、分裂生长，细胞会不断积累遗传变化和突变，从而影响细胞行为、生长特征、遗传特性等。这就是为什么必须定期对细胞株进行鉴定的重要原因。
7.冻存的细胞可以直接进行细胞株鉴定吗？
答：可以直接对冻存细胞进行细胞株鉴定。但要保证冻存细胞的数量至少为1x10的5次方、可以提取到足够DNA。
8.目前，哪些期刊要求投稿时需要提交细胞株鉴定报告？
答：Nature Publishing Group中Nature、Nature Biotechnology等9个子刊；American Association for Cancer Research Publications中Cancer Discovery、Cancer Immunology Research等8个子刊；BioMed Central Journals中BMC Biotechnology、BMC Cancer等24个子刊；Bentham Science Publications中Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry、Current Biotechnology等16个子刊；American Association for Cancer Research (AACR) Publications中Cancer Discovery、Cancer Immunology Research等8个子刊；Endocrine Society Publications中Endocrine Reviews Endocrinology、Molecular Endocrinology等5个子刊；Society for Endocrinology Publications中Endocrine-Related Cancer、Journal of Endocrinology等3个子刊；以及BioTechniques、Cancer (Journal of the American Cancer Society)、Carcinogenesis、Cell Biochemistry and Biophysics、Cell Biology International、Clinical Orthopaedics and Related Research、In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal、International Journal of Cancer、Investigative Ophthalmology and Visual Science (IOVS)、Journal of Molecular Biology、Journal of the National Cancer Institute、Molecular Vision、Neuro-Oncology、PLOS ONE、The Open Breast Cancer Journal (Bentham Open)、Placenta AACR Journals等期刊。
以上期刊名称并不详尽。总之，目前越来越多的期刊都有此要求。因此，小编建议大家，文章投稿前最好进行细胞株鉴定。
9.细胞株STR鉴定周期有多长时间？
答：细胞株STR鉴定从DNA提取到图谱呈现，实际上几个小时就可以完成。但第三方鉴定机构的周期一般会久一点，有的需几个工作日，有的需要一周甚至更长的时间。苏州鉴达 (Genetic Testing Biotechnology, GTB) 一般1-2个工作日便可完成鉴定、出具报告。
10.如何尽可能避免细胞发生交叉污染？
答:使用无菌操作技术和无菌器材；对细胞株进行正确标记和冻存；细胞传代、进行细胞实验时规范操作；从可靠权威的单位采购细胞株；定期对细胞株进行细胞株鉴定。
参考文献：
1. American Type Culture Collection Standards Development Organization Workgroup ASN-0002, Cell line misidentification:the beginning of the end. Nat Rev Cancer. 2010 Jun;10(6):441-8.
2. Masters JR et al., Short tandem repeat profiling provides an international reference standard for human cell lines. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001;98(14):8012±8017.
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