PCR扩增反应三部曲以及DNA（靶序列）的制备的步骤
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)是一种体外扩增特异性DNA片段的技术。它可以在体外特异地对目的基因进行大量扩增，其巧妙之处在预先设计合成二段分别与待测目的基因二端互补的引物，以起到指向定点的作用；再借助于DNA聚合酶催化的若干次扩增反应后，即可使特定的基因片段成百万倍的扩增。扩增反应分三步：
①变性：当通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离形成单链DNA。
②褪火：当温度突然降低时由于模板分子结构较引物要复杂得多，而且反应体系中引物DNA量大大多于模板DNA，使引物和其互补的模板在局部形成杂交链，而模板DNA双链之间互补的机会较少。
③延伸：在DNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷三磷酸底物，以及Mg2+存在的条件下，
以引物为起始点，从5′→3′催化的DNA链延伸反应。
以上3步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一循环的模板，若干次循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA片段就得到了大量的复制，数量可达2×107～8拷贝，PCR的实验操作包括模板DNA(或RNA)的制备、引物的设计合成、酶促聚合反应、反应产物的检测等。
操作步骤
模板DNA(靶序列)的制备
进行PCR扩增反应的模板可以是人体组织细胞的染色体DNA，微生物的DNA，或是由mRNA反转录而成的cDNA等。本实验用小鼠肝脏制备染色体DNA作为PCR扩增的模板。
1. 取肝组织0.5g加入2ml裂解液。
2. 冰浴匀浆。
3. 取匀浆液200μl加入裂解液200μl。
4. 加入蛋白酶k至终末浓度为100μg/ml。
5. 以上溶液在65℃保温数小时或过一夜，不时震摇。
6. 加入75μl 8M KAC，混匀。
7. 在4℃放置15分钟。
8. 加入750μl氯仿。
9. 经充分震摇后5 000rpm、离心5分钟，将上清液转入一新的Eppenderf管，沉淀弃去。
10. 加入750μl无水乙醇，充分混匀，-20℃静置30分钟。
11. 12 000rpm、离心10分钟，弃去上清，沉淀用500μl 70%乙醇洗一次，10 000rpm、再离心5分钟，弃去上清，于室温将有DNA沉淀的Eppendorf管敞开15～30分钟，使痕量乙醇挥发。
12. 将DNA沉淀团块溶于100μl TE缓冲液，加RNA酶1μl，在37℃水浴放置30分钟。
13. 用等体积的酚/氯仿抽提一次。
14. 取上清，加入1/10体积的NaAc(pH4.8)和2倍体积的无水乙醇，混匀。
15. 12 000rpm、离心10分钟，弃去上清，沉淀用500μl 70%乙醇洗一次，10 000rpm，再离心5分钟，弃去上清，于室温将有DNA沉淀的Eppendorf管敞开15～30分钟，使痕量乙醇挥发。溶于50μl TE。
16. 取1μl样品用500μl双蒸水稀释，在260nm和280nm处测定吸光度。鉴定样品纯度并计算其含量。
17. 将DNA溶液保存于-20℃备用。
