扫描电镜生物标本制备实验
| 实验材料 | |
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| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 标本的初步处理 待检标本都具有柔软而且含有大量水分的特点，在高度真空的扫描电镜中观察的标本都必须是干燥标本，因此，病毒标本在用扫描电镜观察之前都必须进行预处理并达到以下要求： (1) 标本的预处理要求：①尽可能使标本的形貌和结构保持活体时的近似形态，以便能如实地反映标本本来面目改）②在尽可能减少标本变形的条件下，除去标本中的水分，以提高标本耐受电子束轰击的能力，减少标本因电子束照射而发热产生图像飘移标本熔化和破裂的现象；③标本表面应有良好的导电性能和二次电子发射率，以减少和防止标本的荷电效应，提高图像的分辨率。扫描电镜标本的初步处理主要包括取材、表面清洁、固定、漂洗、脱水、干燥、喷金等过程。固定漂洗和脱水等步骤的处理方法基本上均沿用透射电镜的生物标本制备方法，其中扫描电镜标本处理的特殊要求如下。 (2) 标本处理的特殊要求：①由于扫描电镜主要是二次电子图像，观察标本的外表形貌，其放大倍率变化范围大，可从几倍到儿十万倍，标本室相应的也大得多，因此可以观察较大的标本，生物组织一般可取 8~10mm2 左右，厚度可达 5mm; ②扫描电镜要观察的是一个结构完整而无杂物的清洁表面，但是许多生物标本的表面常附有粘液、血液、组织液及灰尘等杂物会妨碍观察，掩盖组织结构，以致造成对图像的错误解释，故在固定前必须采取相应的方法清洁标本表面。一般可用生理盐水或缓冲液清洗，也可用超声波或乳酸溶液清洗。 2. 标本的干燥 标本均要经过干燥处理后方能镀金进行扫描电镜观察。但多数柔软的组织，在干燥时要发生明显的塌陷和畸变。由于组织对应力的耐受性不同，以及组织被固定的程度不同，标本表面的畸变亦不相同，大致有以下几种：①自然干燥引起的收缩；②组织的部分收缩引起小的和微小的龟裂；③以组织中的细胞为中心的收缩而引起细胞间的龟裂; ④由于表面张力而引起纤毛、菌毛、微绒毛等微细结构的凝集和收缩。因此，干燥过程是制样中最关键的一步。目前常用的干燥方法主要有空气干燥法、临界点干燥法、冰冻干燥法和真空于燥法，其中以临界点干燥法为佳。 展 |
