反向高效液相色谱柱使用及维护
反相高效液相色谱（RP-HPLC）是一种基于溶质表面、极性流动相和非极性固定相之间疏水作用的色谱模型。任何有机分子的结构中都有非极性疏水部分。零件越大，一般保留值越高。它广泛应用于高效液相色谱。在生物大分子的反相液相色谱（RP-LC）条件下，大多数流动相为酸性、低离子强度的水溶液，含有一定比例的有机改性剂，如异丙醇、乙腈或甲醇等，能溶于水。大量填料是直径大于30纳米的硅胶烷基键合相。此外，还有一些聚合物微球。
反相高效液相色谱柱的应用与维护
在日常分离分析工作中，正确使用和维护反相高效液相色谱柱是非常重要的。色谱柱的正确使用直接影响色谱柱的使用寿命。稍有不慎，就会降低塔效，缩短使用寿命，甚至损坏塔。在色谱运行期间，需要注意以下问题来维护色谱柱。
（1）柱在装卸和更换时，动作应轻，接头应适当拧紧。为了防止柱床产生空隙，必须防止强烈的机械振动。
（2）如果仪器用于常规分析，样品种类有限，但分析次数较多，建议每种常规分析配置一个专用柱，有助于延长柱的使用寿命。
(3)避免压力温度的急剧变化和机械振动。塔内温度的突然变化或塔内温度从高位下降，都会影响塔内的填充条件。塔压的突然升高或降低也会对填料产生冲击。因此，在调节流量时应缓慢，在阀门喷射时，阀门的旋转不应缓慢。
（4）应逐
逐步变化的溶剂的组成，特别是反相色谱，不应直接从有机溶剂转变为所有的水，反之亦然。
（5）使用柱温控制装置时应注意通过流动相后才能升温。
(6)一般情况下，反相高效液相色谱柱不能回流，只有生产者表示柱可以反向冲洗以将残留在柱头中的杂质反冲洗否则反洗会迅速降低塔效。
(7)选择合适的移动相避免固定相位被破坏有时可以在取样器前面连接一个预柱。分析柱与硅胶粘结时，硅胶柱为硅胶柱，在进入分析柱前能使硅胶流动相饱和，从而避免硅胶柱在分析柱中的溶解。
(8)必须对样品进行预处理或在注射器和色谱柱之间连接保护柱，以避免将复杂的基体样品，特别是生物样品直接注入人体柱。保护柱通常是由类似的固定相填充的短柱保护哨所可以而且应该经常更换。
（9）色谱柱常用强溶剂清洗，以除去保留在色谱柱中的杂质。在清洗过程中，对流系统中流动相的位移应逐渐与混合溶剂过渡，每个流动相的体积应为色谱柱体积的约20倍，即需要50至75mL进行常规分析。
（10）柱内填充乙腈或甲醇，拧紧柱接头，防止溶剂蒸发和干燥绝对禁止将缓冲液留在列中过夜或更长时间。
（11）反相高效液相色谱柱在使用过程中，如果压力升高，可能是烧结过滤器堵塞，应更换或拆下过滤器进行清洗；另一种可能是高分子进入柱内，污染柱头；如果柱效降低，或是色谱柱压力升高，则可能是高分子进入柱内，污染柱头。色谱峰变形，柱头可能塌陷而死亡。音量增大了。
(12)分离分析工作完成后不应立即停止色谱分析系统应及时冲洗，一般在0.5h以上以除去柱中的杂质。
