酵母质粒载体的基本信息介绍
酵母质粒载体是基因表达载体的一种,既可以在大肠杆菌中、又可以在酵母系统中进行复制与扩增,所以也称为穿梭载体。它分为整合载体和自我复制载体两类。①整合载体：它带有一个酵母URA3标志基因和大肠杆菌的复制和报告基因。由于质粒DNA与酵母基因组DNA之间发生了同源重组,在转化的细胞中可以检测到质粒的整合复制。整合载体中的YIp载体(yeast integrating plasmid)的转化效率低,而且不稳定；②自我复制载体：该类载体在酵母中可以自我复制,主要有YRp(yeast replication plasmid)、YEp(yeast extrachromosomal plasmid)和YCp(yeast centromere plasmid)。YRp在遗传学方面极不稳定；YEp可以很快与酵母内源质粒重组,重组后YEp载体很快复制并扩增。YCp质粒的遗传特性是拷贝数少且遗传性稳定；③酿酒酵母载体系统：酿酒酵母在基因工程技术操作中,作为克隆宿主或作为调节表达序列(如RNA聚合酶识别位点及核糖体识别位点)的克隆载体,其应用广泛。在酵母细胞核中某些自我复制型质粒(如大肠杆菌质粒)也能获得高拷贝。如在酵母中最大限度的表达基因,需要特异的启动子,如乙醇脱氢酶、同工酶一1、磷酸甘油激酶、酸性磷酸酶和α因子等基因的启动子等。通过DNA重组技术,还可以利用酿酒酵母生产外源蛋白。乙型肝炎疫苗就是利用酵母为宿主得到的第一种医用蛋白,另外组织型血纤维蛋白溶源激活因子、胰岛素和水蛭素等蛋白质产品也是利用酵母为宿主细胞生产的。
在实验方案设计中由于酿酒酵母不能对真核内含子进行识别和处理,因而外源基因须使用cDNA,产物蛋白是在胞内表达还是向外分泌也是十分重要的,因为这关系到基因工程下游工程的工艺设计。采用酿酒酵母表达系统还要注意选择适当的启动子和终止子；考查表达盒的稳定性；针对外源蛋白质积累部位的不同,采取相应的处理步骤；还要注意提高产量。
