关于甘露低聚糖的酶法制备介绍
1、甘露聚糖酶液
菌种采用芽孢杆菌WY-45，为本实验室保存。培养基成分(质量浓度，g/l)：魔芋精粉20，牛肉蛋白胨8，酵母提取物4，KH2P04 1，MgS04·7H20 0.5；自然pH值。每250ml三角瓶40ml培养基，50℃，200r/min，发酵96h后，离心去菌体所得上清液即为粗酶液。酶活测定采用DNS法，底物溶液为0.5%的槐豆胶(pH6.5，0.05mol/L磷酸盐缓冲液配制)，50℃水浴中反应10min。酶活测定为1100U/ml，4℃冷藏备用。
2、甘露聚糖酶解
取50.0g椰子壳甘露聚糖，加入1L去离子水，煮沸5min，冷却至室温后用0.1mol/L盐酸调节pn值至6.0，加入25ml粗酶液(共含27500U甘露聚糖酶活)，50℃，150r/min，水解24h。用0.1mol/L盐酸或NaOH溶液使系统pH值稳定在5.8～6.2。水解结束后沸水浴10min灭酶终止反应。酶解液过滤，滤饼用少量水洗，合并滤液。滤液50℃真空浓缩至约300ml。
3、分离和结晶
将活性炭柱用去离子水流速以105ml/h平衡12h后，取含糖量为16.2g的糖液定容至200ml，流速以105ml/h上样。上样结束后，开始进行程序洗脱，洗脱速度为105ml/h，洗脱程序为去离子水水洗约2L以洗净单糖和盐分后，5%～30%乙醇溶液(总体积8L)线性洗脱。洗脱液全部用自动部分收集器收集，1瓶/h。测定所收集样品的总糖含量，并TLC检测糖组成。合并含同一单组分的收集液55℃真空浓缩至过饱和糖浆之后，加入稍许相应的低聚甘露糖的晶种，室温静置，等待结晶。
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