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空间排阻色谱法的分离机理介绍

2022.4.14

  1、主要取决于凝胶的孔径大小与被分离组分分子尺寸之间的关系,与流动相的性质没有直接的关系。

  2、样品分子与固定相之间不存在相互作用,色谱固定相是多孔性凝胶,仅允许直径小于孔径的组分进入,这些孔对于溶剂分子来说是相当大的,以致溶剂分子可以自由的扩散出入。样品中的大分子不能进入凝胶孔洞而完全被排阻,只能沿多孔凝胶粒子之间的空隙通过色谱柱,首先从柱中被流动相洗脱出来;中等大小的分子能进入凝胶中一些适当的孔洞中,但不能进入更小的微孔,在柱中受到滞留,较慢地从色谱柱洗脱出来;小分子可进入凝胶中绝大部分孔洞,在柱中受到更强的滞留,会更慢的被洗脱出;溶解样品的溶剂分子,其分子量最小,可进入凝胶的所有孔洞,最后从柱中流出,从而实现具有不同分子大小样品的完全分离。在分子排阻色谱法中,溶剂分子最后从柱中流出,这一点明显不同于其他液相色谱法。

  3、在SEC中,不同尺寸样品分子的分布系数K总保持在0~1之间。K=0 说明溶质完全被排除在填料孔外,称为全排斥,即填料的排斥极限;K=1 说明溶质可完全进入填料孔内。称为全渗透,即填料的渗透极限。

  4、对与某一大小分子其洗脱一体积等于流动相体积与该尺寸溶质可以渗透进入空洞内部的那部分体积的总和。Ve=Vo+KVp

  固定相:凝胶 按机械强度分 软质凝胶(葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶);半刚性凝 胶(苯乙烯-二乙烯基苯共聚物);刚性凝胶(高交联度苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、多孔球形硅胶、羟基化聚醚多孔微球)。按化学性质分 有机凝胶(均匀凝胶、半均匀凝胶、非均匀凝胶);无机凝胶(非均匀凝胶)。

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