国际参考实验室临床酶学室间质量评价(RELA)技术方案
作者：陈宝荣,邵燕,陈琦,孙慧颖,胡滨 作者单位：北京航天总医院,北京 100076
【摘要】 目的：建立并评价国际参考实验室室间质量评价(RELA)技术方案，使之符合国际参考实验室质量要求。方法：以GGT为例，按IFCC要求建立本室的RELA技术方案，对影响检测质量的关键技术环节建立相应的控制方法，每一关键技术环节达到质量要求后用于室间质量评价活动，质量评价样本的测定采用JCTLM认可的IFCC 37℃条件下酶催化活性测量参考方法，以均值和不确定度报告结果。IFCC评价结果返回后，撰写年度RELA总结报告。以国际参考实验室通过标准评价本室建立的RELA技术方案。结果：以建立的RELA技术方案参加GGT质量评价，2006年GGT测定结果：本室：a样本：1.850 μ/l，不确定度：0.037 μ/l；b样本：3.394 μ/ l，不确定度：0.055 μ/l。国际参考实验室(除掉离群值)：a样本：1.846 μ/l，不确定度：0.038 μ/l；b样本：3.371 μ/l，不确定度：0.061 μ/l。2007年GGT测定结果：本室：a样本：1.544 μ/l，不确定度：0.013μ/l；b样本：3.894μ/l，不确定度：0.020 μ/l。国际参考实验室(除掉离群值)：a样本：1.526 μ/l，不确定度：0.032 μ/l；b样本：3.820 μ/l，不确定度：0.067 μ/l。结论：建立的RELA技术方案符合国际参考实验室质量要求。
【关键词】 室间质量评价；酶；参考方法
国际参考实验室室间质量评价(RELA)活动是国际临床化学学会(IFCC)组织的全球参考实验室参加的室间质量评价活动，每年进行一次，由德国临床化学学会组织。它代表临床化学与检验医学的最高水平，是国际临床化学与检验医学领域公认的最高水平的质量评价活动。达到该室间质量评价通过标准，是申请国际参考实验室的必备条件。各国参考实验室均以参加该室间质量评价活动，并获通过作为评价实验室技术水平的标志。
我室于2006年、2007年采用本室自建室间质量评价方案参加RELA活动，均取得满意成绩。现将建立的室间质量评价技术方案报告如下。
1 材料
1.1 质量评价样本
a、b样本各5瓶，冷冻干燥粉末，要求测定前-20℃以下保存。由德国临床化学学会提供。
1.2 有证标准物质 (ERM AD452/IFCC）：比利时标准物质研究所研制。批号：N。.766(2006年使用), N。.767(2007年使用)。ERM靶值：114±2 U/L，冷冻干燥粉末，要求测定前-20℃以下保存。
1.3 室内质量控制样本
Roche公司生产的cfas。批号：170630-12。靶值：121 U/L。冷冻干燥粉末，要求测定前2℃～8℃保存。
1.4 试剂
N-甘氨酰甘氨酸(Fluke公司,lot：419807)；无水L-γ谷氨酰-3-羧-4-硝基苯胺(Fluke公司,Lot:1308801)。
1.5 主要仪器
DU-800紫外分光光度计(美国贝克曼公司)；Fluke 点式温度计（美国）；Microlab 500稀释配液仪(美国 Hamilton公司)。
2 方法
2.1 RELA技术方案建立
样本接受与处理——建立室间质量评价技术方案——材料准备与验证——参考方法性能验证——质量评价样本测定——数据处理——结果报告——总结报告撰写
2.2 影响酶活性测量关键技术环节的质量控制方案
2.2.1 RELA样本接受与处置
RELA样本由德国临床化学学会速递至各参加RELA单位。由于酶自身的结构特性，为确保酶测定结果正确，本室制定RELA样本接受方案：在接收RELA样本时，须认真核对样本储存外容器是否含有干冰，样本容器是否完整，标签、编号是否清晰，送达时间是否符合要求。确认上述各条无误后，将样本迅速移至-75℃以下冰柜保存至测量时。
2.2.2 试剂验证
由于酶自身的结构特性，关键测量试剂的纯度对酶活性正确测定影响明显。酶催化反应基质和偶联反应指示酶的纯度和杂质种类与含量是直接影响酶活性正确测量的关键因素，在订购试剂时应根据IFCC参考方法要求寻找适宜品，并按照IFCC参考方法细则中试剂技术要求建立评价方法。符合标准的试剂用于RELA活动。
2.2.3 仪器检定与校准
为有效避免由于仪器误差给酶活性测定带来影响，在进行RELA样本测定前，对影响酶活性测定的主要仪器性能进行检定与校准。包括：(1)点式温度计：实验中用于测定比色杯内温度。检定温度：37℃。要求：37℃±0.1℃。(2) 分光光度计：用于检测酶活性。检定内容包括三部分：波长：采用氧化钬玻璃滤光片检定分光光度计波长准确性。要求：340 nm波长检定结果在340 nm±1 nm 范围内。吸光度：采用标准中性滤光片检测可见光区透射比准确度。要求：440 nm、546 nm、635 nm处吸光度在标准吸光度±0.002A。采用标准重络酸钾溶液检测紫外光区透射比准确度。要求：340 nm处吸光度在标准吸光度±0.002 A。采用杂散光滤光片在220 nm、360 nm监测仪器杂散光。要求：仪器杂散光<0.002 A。比色杯光径：检定比色杯：内径10 mm。要求：10 mm±0.01 mm。(3)天平：用于准确称量各种试剂、水、样本等实验材料。要求：称量量±0.005×称量量。(4)加样器校准：采用天平称重法校准各加样装置即容量器具如加样器、稀释配液仪、容量瓶等。(5) pH计校准：采用有证缓冲液和符合计量学要求的容量瓶配制标准缓冲溶液进行校准。
2.2.4 参考方法性能验证
为保证参考方法检测性能达到国际参考实验室要求，对参考方法性能验证含两部分：精密度：<1％；准确度：标准物质测定3次，均值在“靶值±不确定度”范围内，且三次测定变异率<1％。
2.2.5 质量评价样本测定
(1) 检测样本制备：a、b样本各5瓶全部采用天平称重法复溶，按样本名称及瓶号进行编号，如GGT1a、GGT2a、GGT1b、GGT2b等。a检测样本：每瓶a样本取0.8 ml放5 ml棕色瓶(该瓶为5瓶样本混合瓶)，共4.0 ml，分2份。1份当日直接测量，另一份样本2℃～8℃保存,第二天测量。余下每瓶样本放-80℃保存待用。b检测样本制备同a。(2) 检测时间与频率：a、b检测样本测定时间均为2 d。每份样本每天测量3次。
2.2.6 不确定度的计算
按《不确定度表达指南》要求进行计算。
2.3 质量评价样本测定
采用“检测样本制备”方案制备的混合样本，按IFCC 37℃条件下酶催化活性测量参考方法[2]测定每份样本GGT活性。
2.4 数据处理
每份样本6次测定数据全部记入检测结果记录表。检验数据有效性后，计算均值和不确定度。
2.5 结果报告
将计算后的测定结果按IFCC要求填入RELA结果回报表中，并将该表内容填入网上回报表中。
2.6 年度室间质量评价总结报告的撰写
为有效跟踪实验室检测质量，RELA活动结果返回后，实验室对检测结果进行分析，写出年度室间质量评价总结报告，内容包括：参加项目，每项检测结果分析，本室结果是否通过国际参考实验室设定标准，与国际参考实验室结果是否存在明显差异，差异的技术原因分析。与国内参考实验室结果比较。必要时采用“检测样本制备”方案中留存于-80℃样本重新测定，以明确检测差异原因。
3 结果
3.1 2006年RELA结果
2006年全球共有16家参考实验室参加RELA GGT活性测定，中国有6家。全部16家实验室结果中出现5个离群结果，结果偏高2个，偏低3个，其余实验室检测结果分布集中。6家中国实验室检测结果均分布在中心区。对全部参考实验室结果进行分析(见表1)。
3.2 2007年RELA结果
2007年全球共有15家参考实验室参加RELA GGT活性测定，中国有8家。全部15家实验室结果中出现1个离群结果，其余实验室检测结果分布集中在“均值±5.25%”。8家中国实验室检测结果除63号外，均分布在中心区,我室包含其中。对全部参考实验室结果进行分析，结果(见表2)。
4 讨论
由于RELA活动是参考实验室申请国家或国际参考实验室必须参加的质量评价活动，各参考实验室均非常重视此项活动。但RELA活动组织方只提供RELA样本，不提供测量技术方案，因此建立有效的RELA活动方案是参考实验室能否顺利通过国际参考实验室RELA标准的关键。
由于RELA活动样本量有限，参考方法测定价格昂贵，操作繁琐费时，技术要求高，各参考实验室都在寻找适合本实验室的低价高效的RELA技术方案。本室在总结国内室间质量评价经验的基础上，根据JCTLM认定的GGT催化活性测量参考方法的技术要求，结合IFCC文件制定本技术方案，对影响酶活性测量的多个关键技术因素均建立质量控制方案与评定标准，RELA活动中严格按技术方案要求进行。此方案用于参加2006、2007年第四、五届RELA活动，取得了良好成绩，顺利通过RELA及格标准。表明我室建立的RELA技术方案符合国际参考实验室测量要求。
