DNA印迹杂交分析实验
放射标记法
| 实验方法原理 |
本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。
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|---|---|
| 实验材料 | DNA |
| 试剂、试剂盒 | SDS SSC |
| 仪器、耗材 | 水浴锅 培养箱 |
| 实验步骤 |
1. 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。
2. 将膜的DNA面朝上置于杂交管中，ATP溶液的加入量为约1 ml/cm2 膜，在68℃杂交炉中滚动3 h。
3. 在预杂交即将结束时，于100℃将DNA探针变性10 min，置于冰中。
5. 倒掉APH液，加入等体积的2×SSC/0.1%SDS，室温下滚动温育10 min。5 min后更换洗膜液。
6. 用等体枳的0.2×SSC/0.1%SDS替换上述洗膜液，室温下滚动温育10 min 后更换洗膜液
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