材料 无菌 悬浮细胞培养 培养液,l00 ml D-PBSA(细胞计数用) 24 孔板 非无菌 装培养板的塑料盒 CO2 温箱或 5% C02 以充盈塑料盒 操作步骤 1. 如单层培养那样(见方案 21.8 ) 将生长液中的细胞悬液以不同浓度加人到孔中。 2 . 以不同时间从三孔中取样 0.4 ml,注意细胞要充满混匀以及完全分散成单个。 3. 用电子细胞计数器汁数(见 21.1.2 节)或用血球计数器计数(见 21.1.1 节)。 4 . 计算每个样本的细胞浓度,像单层细胞生长一样以时间作对数线性作图(见 21.9.3 节)。细胞密度不适用于悬浮培养,因为它们不会贴附。 提示 接种 2 个 75 cm2
培养瓶,每瓶 20 ml 不同农度的细胞悬液。按需要每天从瓶中取 0.4
ml,但取样前要混匀细胞。培养瓶离开温箱的时间要尽量短,在画生长曲线期间不要换培
养液。或者将培养瓶装在振荡器上(Techne,Integra,BeHco),每天取样。如果用振荡培养瓶在一侧瓶口封膜,则不用从温室中取出培养瓶,
也不用打开封口膜就可以取样,将膜面擦净,颠倒一下瓶子用注射器就可将液体吸出。
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