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研究GST标签蛋白，原来可以这么简单

2020.4.29

为什么要研究GST标签蛋白？

谷胱甘肽巯基转移酶（GST）是在真核细胞中天然存在的大小26KDa的蛋白。GSTs可以催化外源性物质结合到谷胱甘肽（GSH）上，因而对诸多环境毒素包括化疗药物、残留的药物、除草剂及致癌物起到解毒作用。许多研究人员将GST的DNA序列整合到表达载体上来生产带有GST标签的融合蛋白。GST能够快速折叠稳定并且具有良好的溶解性，因而可以促进融合蛋白的表达与溶解。此外，还可以利用GST与其底物GSH之间的结合来进行蛋白纯化和检测。目前，GST标签蛋白被应用于多种研究技术，例如pull-down、亲和层析及ELISA。为了方便广大研究人员，Nicoya Lifesciences也推出了用于固定GST标签蛋白的GST功能芯片，令您的表面等离子共振分析更加快速简便。

什么是SPR技术？

表面等离子共振技术（SPR）可以用于分析多种类型的分子间相互作用分析，包括蛋白与蛋白、蛋白与小分子、蛋白与核酸、蛋白与适配子、蛋白与脂质、蛋白与糖类、糖类与糖类等。传统的实验技术如CoIP、ELISA及荧光共振能量转移往往需要繁琐的标记步骤或是复杂昂贵的仪器。大多数的技术仅能获取分子间是否发生结合或亲和力。近些年，越来越多的研究人员开始选择SPR技术来对他们感兴趣的生物分子间作用进行实时检测。SPR是一种无标记分析技术，用于定量分析两种生物分子间的相互作用。同其他技术相比，SPR不仅可以测定亲和力，还可以对两种生物分子间作用进行动力学分析，获取结合速率与解离速率。

SPR实验设计中芯片选择

在开始SPR实验时，您首先需要选择适合您的SPR芯片。芯片由玻璃介质、纳米金颗粒及颗粒表面的功能修饰所组成。芯片的选择取决于您所使用的配体，即需要固定到芯片表面的分子的属性。GST芯片可以大大简化GST标签蛋白的固定流程，芯片表面的谷胱甘肽（GSH）可以直接捕获GST标签配体以完成固定。

使用OpenSPR GST芯片进行动力学结合分析

下图是使用OpenSPR GST芯片进行GST标签蛋白的固定及动力学结合分析。GST-ubiquitin被固定在GST芯片上，使用OpenSPR仪器对Ubiqutin抗体与Ubiqutin之间的结合进行动力学分析，KD值为95.3nM。