教你血球计数板细胞计数的方法
1.制备细胞悬液：对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物按如下步骤制备成细胞悬液。
①终止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。
②给培养瓶内加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。
③加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。
2.计数与计算过程
①在细胞计数板中央放置计数的盖玻片。
②用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。
③置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
④按下式计数细胞悬液的密度：细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml 。
二、注意事项：
①务必使分散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。
②显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分。
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