热原检查采用家兔法
《中国药典》二部采用家兔法检查热原,将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内,在规定时间内观察家兔体温升高的情况,以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。给家兔注射一定量的热原后,一般15～30分钟体温开始上升,70～120分钟达到最高峰。检查结果的准确性和一致性取决于试验动物的状况、实验室条件和操作的规范性。
(一)试验动物
热原检查的试验动物为家兔,应符合:①健康合格,体重1.7kg以上,雌兔应无孕。预测体温前7日应用同一饲料喂养,在此期间内,体重应不减轻,精神、食欲、排泄等不得有异常现象。②对未曾用于热原试验的家兔;或供试品判定为符合规定,但组内升温达0.6℃的家兔;或3周内未曾使用的家兔均应在试验前3～7日内预检体温,进行挑选。挑选试验条件与检查供试品时相同,仅不注射药液,每隔30分钟测温1次,连续测4小时,共测8次。4小时内各兔体温均在38.0~39.6℃,且最高最低温差不超过0.4℃者,方可供试验用。③凡热原试验用过的家兔,如供试品判为符合规定,至少休息48小时后可重复使用。其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上。④如热原检查不合规定时,则组内全部家兔不能再使用。每一家兔的使用次数,用于一般药品的检查应不超过10次。
(二)检查前的准备工作
实1.每批供试品初试用3只,复试用5只家兔。在检查前1～2日,供试用家兔应分别为能处于同一温度的环境中,实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃,实验室的温度0.4℃、 在17～25℃,在试验全过程中,应注意室温变化不得大于3℃,应防止动物骚动并避免解声干扰。
2.家兔在试验前至少1小时开始停止给食,并置于宽松适宜的装置中,直至试验
完毕。测量家兔体温应使用精密度为±0.1℃的测温装置。测温探头或肛温计插人
的深度和时间各兔应相同,深度一般约6cm,间不得少于1分半钟,每隔30分钟测量体温1次,一般测量2次,两次体温之差不得超过0.2℃,以此两次体温的平均值作为1兔的正常体温。当日使用的家免,正常体温应在38.0～39.6℃,且同组各兔间正常体肛门内之差不得超过1℃。
3.试验用的注射器、针头及一切和供试品接触的器皿,应置烘箱中于250℃加热2.分钟,或用180℃加热2小时,也可用其他适宜的方法除去热原。
(三)检查方法
1.测家兔正常体温后15分钟内,自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38可采用供试品溶液,然后每隔30分钟测量体温1次,连续测6次。
2.每只兔的正常体温与注射供试品溶液后6次测量体温中最高的体温之差即为该兔体温的升高温度。
(四)结果判定
1.符合下列情况者,判为符合规定在初试3只家兔中,体温升高均低于0.6℃,并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃;或在复试的5只家兔中,体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超过1只,并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或3.5℃以下。
2.有下列情况之一者,复试一次3只家兔中1只体温升高0.6℃或0.6℃以上;3只家兔升温均低于0.6℃,但3只家兔升温总和达1.3℃或1.3℃以上。
3.有下列情况之一者,判为不符合规定在初试3只家兔中,体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只;或在复试的5只家兔中,体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只;或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5℃。
4.出现负值的规定如下当家兔升温为负值时,均以0℃计。
(五)注意事项
1.建议应尽量使用热原测温仪测温,因为其感温探头在整个测温过程中都置于兔门内,兔较安静,所测体温较正确,同时也避免了给药后1小时、2小时、3小时测温这项规定造成的漏检现象。
2.热原的耐热性能良好,60℃加热1小时不被分解破坏,100℃不降解,但180℃3-4小时、200℃60分钟或250℃30～45分钟可使热原彻底破坏。因此耐热物品如玻璃制品、金属制品、生产过程中所用的容器和其他用具以及注射时使用的注射器等,均可采用此法破坏热原。
3.热原实验室内外应保持安静,避免强烈直射的日光或灯光及其他刺激。室温应为17～25℃,且在全部试验过程中,室温变化不得大于3℃
4.有的供试品如腺苷三磷酸二钠注射时要注意速度应缓慢,否则易造成家兔死亡。
5.试验过程中,要及时填写兔卡及原始记录。
