关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

细胞培育根本技能

2019.11.28

为了削减污染对细胞培育的影响,有必要树立细胞冻存库。细胞冻存库应该分主细胞库(Master cell bank,MC和作业细胞库(Working cell bank,WC,当需求做试验时从主细胞库中复苏细胞树立作业细胞库。每一个冻存标本都应明确记载细胞的性质、代数及有无污染。一起还应树立标准的检测程序进行菌检及细胞判定。

为了确保培育细胞系的完整性,有必要进行具体的试验记载,应包括以下内容:细胞系的品种及来历、有无污染(如细菌,病毒,支原体)、细胞代数和倍增时刻、以及挑选性骤变。具体的记载有利于对细胞的遗传及生理特性在惯例传代培育中因骤变、污染及各种原因导致的改动进行剖析。经过接连传代培育的细胞与它较早代数的冻存细胞比较,跟着培育时刻的延伸,细胞在适应环境的过程中,其生物特性已发作了改动。培育的细胞由若干成长速度及生机各异的亚群组成。跟着培育时刻的延伸成长速,度快及生机高的细胞亚群逐渐占优势这种挑选性,趋势会影响整个细胞群的生物特性。应用不同代数的细胞接连进行试验则结果会发作误差。树立细胞冻存库就能防止这种影响经过复苏相同代数的细胞,人们就能在较为均一的条件下重复试验。

细胞培育作业需求清洁,坚持杰出的环境及标准的操作程序。超净作业台是细胞培育中遍及运用的无菌操作设备,它需求合理的安置及经常性的保护。超净作业台的作业原理是驱动经滤菌净化后的空气,经过作业台面构成气流屏障,然后阻挠外界污染物的侵入并使操作过程中发作的飞沫约束在超净作业台中。由于操作过程中可能产生有毒的物质,所以采用垂直气流比水平气流安全。

当进行移液,倾倒液体的操作过程会发作飞沫并堆积在超净作业台内物体的外表。超净作业台的气流并不能阻挠飞沫的发作,飞沫会跟着气流的方向飘浮。超净作业台不合理的放置、不恰当的保护以及不标准的运用会破坏超净作业台气流的方向导致飞沫更广泛的堆积。酒精灯的火焰、操作者的活动、说话、咳嗽及打喷嚏都有可能影响气流。飞沫的堆积是导致超净作业台内物品污染的主要因素形成潜在污染的进一步传达。因此为削减穿插污染的发作,应尽可能削减超净作业台内的物品。不同细胞系以及同一个试验室不同操作者所运用的培育试剂一定要分隔运用,如胰酶、培育液等。不然,一个操作者的失误可能引起一切细胞发作污染。


推荐
关闭