细胞污染过程中常见的微生物污染和预防（二）
念珠菌污染呈链状排列，呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。
图5 白色念珠菌污染 常见的细胞污染之一，左侧为倒置显微镜下视图，右侧为革兰氏染色图片，其中，长梭型的是处于分裂期的链珠菌
酵母污染很容易观察到，培养物变浑浊，尤其在后期。一般pH值变化很小，严重时，pH值升高。显微镜下呈卵圆形或球形颗粒，有些会芽生较小颗粒。
图6 酵母菌污染
3.支原体污染
支原体是一类无细胞壁、大小介于细菌和病毒之间（直径在0.13～0.18 μm）并独立生活的微生物，可穿过0.22 μm 的孔径滤膜！光镜下难以看清它的形态结构！并对青霉素有抗药性！简直就是细胞培养界的隐性杀手有木有！
主要来源：血清
特点：支原体污染不能用肉眼或光学显微镜检查细胞观察出来，带有一定的隐蔽性，易被人们忽视。当细胞被支原体污染后，在光镜下常可见到细胞核及胞浆内出现大小不等的颗粒或空泡，细胞营养液可能毫无变化，短期内细胞没有明显的病理变化，也可以因为传代或换液而缓解。只有当污染严重时才影响细胞增殖，使细胞脱落。支原体可以与宿主细胞形成一个共生关系，使污染不断扩大。一旦发生支原体污染，支原体可以通过移液、倾倒液体时产生具有潜在感染力的飞沫和吸附的尘埃，沉积在物体表面。这种污染性尘埃能存活数天甚至数周，使操作环境受到污染，若不及时处理还会产生交叉污染或再次污染。
检测：常用的检查方法为培养检测法，即取1mL细胞培养液加入支原体液体培养基中，培养5天后，观察培养基的颜色变化。如果变黄则怀疑该细胞受到支原体污染。如果不变色，则盲传一代。若颜色变黄，可接支原体固体培养基，于5%CO2培养箱中培养3～5天，观察有无“煎蛋”状支原体菌落。一旦发生污染即淘汰该细胞和培养液。
图7 支原体污染 煎蛋状和其他形状，左侧：电镜照片(×30k)； 右侧：电镜照片（×12k）
此外，支原体污染还可用荧光染色法和相差显微镜观察法等检测方法,或者直接购买支原体检测试剂盒进行检测。
4.黑胶虫污染
黑蛟虫是一种生物还是非生物，学术界还有争论。可以穿透滤膜，也可以通过空气传播。
主要来源：血清
特点：开始污染时对细胞无影响，当数量达到一定程度时就会对细胞产生影响。400倍显微镜下可见点状或片状游动小体。，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。
5.病毒污染
尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。
主要来源：动物血清或者细胞系，常见于杂交瘤细胞。
特点：极为隐蔽，很难用常规的方法检测到。受病毒污染的细胞液通常清亮无变化，大多数受病毒污染的细胞不会产生形态变化及细胞病理现象，少部分病毒会造成细胞变圆、肿胀，脱落。
检测：可用血细胞吸附试验、免疫荧光抗体法及电子显微镜法有效检出病毒。通常病毒物污染的清除是十分困难的，可以重新引入高质量的细胞株。
