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生化分析仪试剂参数设定原理

2018.8.09

在特定的温度下，一般是37度，待测物质直接或是间接或试剂中的底物发生反应，使整个液体环境的吸光度或是颜色发生变化，这个变化可能是变深或变淡，根据朗伯比尔定律，然后我们用数字光电设备去监测发生的变化，把颜色转化成电信号再转化成数字，电脑再加以计算，套入我们预先设定好的公式，这样就有结果了。

*朗伯比尔定律

又称比尔定律，是光吸收的基本定律，适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目,在我们生化分析上通俗的说就是光通过颜色均匀的液体光被吸收的多少或是颜色的变化和液体中物质的浓度成线性关系。

例如AST和GLU的检测原理：

L-天门冬氨酸+ α-酮戊二酸 —AST— 草酰乙酸+ L-谷氨酸

草酰乙酸+ NADH +H+ —MDH— L-苹果酸+ NAD+ + H2O

NADH在340nm有吸收峰，所以NADH的减少速度就可以反应出AST的含量

葡萄糖 + H2O + O2 —葡萄糖氧化酶—H2O2 + 葡萄糖酸

2 H2O2+ 4-氨基安替比林+酚—过氧化物酶—醌亚胺（红色）+ 4 H2O

生成红色的醌亚胺在500nm波长就可以检测到。

一、分析方法的选择：

常见的分析方法有:终点法,速率法。

1 终点法：一般分一点终点法和两点终点法，一点法其原理是经过一定反应时间后,反应达到平衡时进行的一点分析。例如:溴甲酚绿法测定白蛋白均用该法。对于反应快的物质选用一点终点分析法。二点终点法，是用二点的吸光度之差进行计算。

2　速率法：也叫速度法或连续监测法，多数用于酶活力的测定。所有酶活力测定均选用速率法。其原理是根据酶所催化反应的速率来测定酶活力的大小，实际操作时要注意反应的方向，正反应和负反应。

二、双波长测定中辅波长的选择：

双波长的应用是为了消除样品中对测定有干扰的物质的影响,而实际应用中选择第二波长主要用于消除脂血、溶血、黄疸等的干扰。例如:钼酸铵法测定无机磷,其测定波长为340ｎｍ,对于溶血样品,血红蛋白在340ｎｍ有较强吸收,其吸光度同380ｎｍ处吸光度相同,选用380ｎｍ作辅助波长,可消除溶血对测定的干扰。

三、测定时间的选择：

对于终点分析,测定时间的选择应充分考虑到干扰的问题。例如:溴甲酚绿法测定白蛋白选用终点法,白蛋白同溴甲酚绿反应快,在一分钟内基本上反应完全,随着反应时间的延长,α球蛋白同溴甲酚绿反应形成干扰,因而溴甲酚绿法测定白蛋白,其测定时间应定于1分钟。对于速率法,一般用于酶的测定,而酶活力的大小是用反应速度来表示 ,因而要求在零级反应期内测定反应速率,此时的反应速率不受底物浓度的影响,仅同酶活力大小有关。因此,测定时间应选在零级反应期内。对于一种物质的测定,由于选择试剂和分析方法不同,其测定时间也随之变化,因而对于特定的试剂和分析方法,应先做出反应进程曲线,从曲线上选择最佳的测定时间。

四、样品量和试剂量的选择：

对于不同的全自动生化分析仪,其测定所需的反应液总量不同。而试剂厂商给出了样品量和试剂量的最佳比例,根据比例同时缩小或增加用量,同时满足最小的反应液总量。

五、校正点的设置：

对于多数项目的测定,其浓度同吸光度变化基本上成线性关系,选择低、中、高三个校正点可获得满意的准确度。如果只设置一个校正点,尽量选择一个中值校正点。对于有些物质,例如比浊法测定免疫球蛋白,其浓度同吸光度不成线性,因而需要尽可能多设置不同浓度的校正点。全自动生化分析仪的应用,提高了检验质量和速度,为临床作出诊断、决定治疗方案、判断疗效和预后提供了可靠依据,为了使用好全自动生化分析仪,最重要是恰当设置各种分析参数。随着分析方法的提高及试剂的更新,分析参数也随之变化。

六、吸光度限制的设置：

试剂吸光度上下限有的生化仪要求设置试剂吸光度上下限，主要是用来监测试剂的质量的，我们在实际工作中就遇到酶活力测定的试剂空白数据在规定限值内，但质控物测定结果连续偏低，病人结果因每天标本少而难以判断，最后发现是试剂质量下降。

目前主流的全自动生化仪有贝克曼BeckmanCoulter的DXC800、AU5800，Roche，Abbott等，所以每种型号的仪器上的参数设置方法是不一样的，我们的应用工程师会根据试剂的说明，然后再每种仪器上设置不同的参数，应用于临床。