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哺乳动物细胞真核表达系统的优势有人想知道吗

2021.5.23

   哺乳动物细胞真核表达系统则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体, 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解,这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组,通过质粒上带的筛选标记,通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性,因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。而不能用于纯化蛋白。

  此外,哺乳动物细胞真核表达系统还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统,其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒(特殊质粒,用于杆状病毒表面展示系统)给昆虫细胞,然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞,来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组,获得目的基因,并且最终表达于病毒子的表面,所以成为表面展示系统。

  哺乳动物细胞真核表达系统的优势能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性:哺乳动物为真核细胞,细胞器可以对蛋白正确折叠加工。表达水平高:载体可在哺乳动物细胞中高表达重组蛋白,表达量可高达1-3g/L蛋白表达高效稳定:高效启动子控制,稳定表达,并可以选择多种表达系统选项:瞬时表达、稳定细胞株表达、营养缺陷型细胞株表达、大规模悬浮细胞表达等适合大规模蛋白表达:常用的哺乳动物表达宿主细胞,使用悬浮细胞培养,可以在一个月内可产生数克级蛋白。
 




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