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液相色谱仪测定蜂王浆中葵烯酸

2019.9.18

方案优势

至今为止，10-HDA 含量测定有薄层扫描法、分光光度法、气相法、液相法，且多见于分析蜂王浆中的10-HDA。薄层扫描法、分光光度法专属性和准确性较差，气相法处理繁琐，目前最为通用的是HPLC法。液相法处理简单、结果准确。超声提取、冷藏沉淀后，用对羧基苯甲酸乙酯做内标，反相液相色谱法测定蜂王浆及其制品中10-HDA含量。

采用标准

国家相关标准

方法/原理/步骤

　　主要试剂

　　1、纯净水(二次蒸馏水)

　　2、甲醇：分析醇

　　3、乙醇：优级纯

　　4、内标物：对羟基苯甲酸甲酯含量99.0%

　　5、10-HAD标准品：99.0%以上。

　　色谱条件

　　色谱柱为Kromasil C18柱，流动相为V(甲醇):V(水):V(磷酸)=55:45:0.2，流速1.0ml/min，对羧基苯甲酸乙酯作内标，检测波长210nm。本法简单、快速、准确，重现性好，回收率高(97.6%～101.8%)。

　　使用前应在放有浓硫酸的减压干燥器内减压干燥24h 6.10-HAD标准溶液：取干燥后的10-HAD标准品约25mg，精密称定，加无水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65mg。7.盐酸(C=0.03mol/L)：量取0.1mol/L盐酸100ml，加入200ml重蒸馏水中。

　　样品处理

　　样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀，取约0.5g，置于已称定的50ml容量瓶中，精密称定，加0.03mol/L盐酸1ml和水2ml，置漩涡混合器上混合使样品溶解，加无水乙醇30ml，边加边轻轻摇动，再精密加入内标溶液10ml，并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，立即置超声波中超声15min，或置漩涡混合器上振荡15min，取出，在3000r/min下离心10min后测定。如不能及时测定，应放置在冰箱中冷藏待测。

仪器设备

　　仪器设备

　　1)蜂王浆中葵烯酸检测分析液相色谱仪LC-600B整套系统由LC600B高压恒流泵：2台,SPD600B紫外检测器：1台,SCL600B系统控制器：1台,混合器：1只,7725i手动进样阀：1只,反控色谱工作站：1套(反控主机),液相色谱柱：1支(C18 4.6*250mn,5um),微量进样器：1支(50ul/100ul),进样支架：1只(进样阀用)等组成；安装、调试及使用都非常简单。

　　2)LC-P600高压恒流泵是微处理器智能控制的往复式双柱塞并联泵，具有工作压力高、脉动小、稳定可靠、操作方便等特点。其机械组件由电脑辅助设计，各主要零部件均在世界先进的数控加工中心制造，因此具有加工精确度高、泵体密封性能好、零件的互换性好等特点。

　　3)LC-UV600紫外检测器采用了平行的双锥孔流通池，样品池和参照池完全处于对等的条件。锥孔设计的流通池，可以在同样的池体积情况下，提高通过池孔的光能量，明显降低了仪器的静态噪音和信号漂移。

　　仪器主要配置

LC600B高压恒流输液泵
输液方式	微体积串联双柱塞
最大输液压力	0～9999Psi
流量设定范围	0.001～9.999ml/min（以0.001 ml/min步长调节流量）
流量设定值误差	≤0.5%
流量稳定性误差	≤0.2%RSD
梯度误差	±1% （0～100%水/ 丙酮水溶液2液梯度）
压力脉动	小于15Psi （流量1mL/min，压力600～1600Psi）
泵密封性	压力为5400Psi，时间为10min，压降小于400Psi
时间程序功能	有
尺寸	W260×H130×D420mm
重量	11kg
使用环境温度范围	4～40℃

SPD600B紫外可见可变波长检测器
波长范围	190nm～700nm
波长示值误差	≤±1nm
波长重复性误差	≤±0.1nm
动态噪声	≤ ±0.75×10-5AU （甲醇，1ml/min，254nm，20℃）
静态噪音	≤ ±0.5×10^-5A 空池，响应时间1秒，20℃）
动态基线漂移	≤±1×10^-4AU/h （甲醇，1ml/min,，254nm，20℃）
静态基线漂移	≤0.5×10^-4 （空池，响应时间1秒，20℃）
线性范围	≥10⁴
最小检测浓度	≤1×10^-9　g/mL （萘/甲醇溶液）
定性重复性	RSD₆≤ 0.1%
定量重复性	RSD₆≤ 0.5%
光谱带宽	6nm
流通池体积	8μL
光程	10mm
时间程序功能	有
尺寸	W260×H130×D420mm
重量	11kg
使用环境温度范围	4～40℃