选择MTT、CCK-8试剂盒的原理和方法
MTT、CCK-8试剂盒是进行细胞增殖和细胞毒性检测的常用试剂盒，在进行实验时应该如何从两种试剂盒中进行选择呢？
一、原理介绍：
MTT试剂盒中含有MTT（化学名：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐），外源性MTT能够被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为深紫色结晶甲瓒，该产物不溶于水，会沉积在细胞中，而死细胞无此功能。加入特定溶剂后，甲瓒可以被完全溶解，然后通过酶标仪测定490 nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，对应的吸光度越高；细胞毒性越大，对应的吸光度越低。
CCK-8（Cell Counting Kit-8）试剂盒广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测。本试剂中含有WST-8（化学名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐），是一种类似于MTT的化合物，它在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在条件下，可被线粒体内的脱氢酶还原为橙色甲瓒产物Formazan，该产物具有高度水溶性，生成的Formazan数量与活细胞数量成正比。检测速度快且灵敏度高于任何其它四唑盐，如MTT、XTT或MTS。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
二、优势介绍：
MTT配制过程需避光、无菌，且MTT比较难溶，需振荡器混匀，配置过程麻烦。MTT试剂盒中是已配制好的组分，实验过程中直接添加即可。与CCK8试剂盒相比，性价比更高。
序号 | 组分 | 500T CT0002 |
1 | MTT溶液 | 5 mL |
2 | Formazan溶解液 | 60 mL |
CCK-8试剂盒，不需配制，无需换液，步骤便捷，灵敏度高。同MTT相比对细胞无明显毒性，一般状况下对细胞形态没有明显的改变，因此加入CCK-8溶液显色后，可选择不同时间点反复用酶标仪读板，找到实验最佳测定时间。
序号 | 组分 | 100T CT0001-A | 500T CT0001-B |
1 | CCK-8溶液 | 1 mL | 5 mL |
三、注意事项：
1、试剂使用前，注意检查是否已完全解冻，必须在完全溶解并混匀后使用。
2、使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意液体蒸发。96孔板外围一圈最容易蒸发，可以弃用外围一圈，改加PBS、水或培养液。也可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以减缓蒸发。
3、最终进行细胞存活率等计算时，需要扣除本底的吸光度，因此要注意进行空白孔的设置。
4、操作时注意不要产生气泡，在最终读板时注意检查孔内是否有气泡。气泡会影响测定结果，可通过轻敲混匀的方式进行消除。
那么，到底应该如何进行选择呢？敲黑板，划重点：
1、如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不高，建议选择性价比更高的MTT试剂盒；
2、如果要求较高的检测灵敏度，建议选择灵敏度高的CCK-8试剂盒；
3、进行大批量样品检测时，建议选择CCK-8试剂盒，因为CCK-8试剂盒操作更便捷；
4、如果细胞毒性要求比较严格，建议选择CCK-8试剂盒，因为CCK-8试剂盒对细胞无明显毒性，一般情况下对细胞形态没有明显的改变；
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