无DMSO、无血清干细胞冻存技术与使用（非程序降温）
含DMSO的冻存液
DMSO是最常用的渗透性冷冻保护剂，广泛应用于细胞的冷冻保存。在细胞水平，DMSO除了是一种DNA致畸因子外，还可渗入细胞内，分子中S=O键可能与细胞内蛋白发生化学反应，致使蛋白变性。因此，有些细胞和组织细胞对DMSO敏感，使用含DMSO的细胞冷冻液会降低细胞复苏后活性，进而影响细胞的功能。临床上，使用经DMSO冻存的细胞会引发广泛的身体不适，最常见的是腹泻（约50%），严重的会造成患者神经系统、呼吸系统损伤甚至死亡（0.2%）。
在没有可替代DMSO的冷冻保护剂以前，为了降低DMSO的毒性，通常采用两种方法——降低冻存液中DMSO的含量以及复苏后洗涤除去DMSO残留。因此，研究者针对不同细胞开发了2.5~10%DMSO并且添加其它不同冷冻保护剂的复合配方。但这些不同种类改良的DMSO冻存液因成分复杂，浓度各异，难以标准化地推广用于多种细胞类型。临床上，使用DMSO冷冻保存的细胞，细胞复苏后最好应洗涤并离心2次，尽可能除去将残留的DMSO，减少不良后果。细胞治疗领域的科学家和医生多年来在研发和寻找无DMSO、低毒/无毒性、冷冻保存效果显著的新型细胞冻存液。
无DMSO冻存液
LiveCyte® DMSO-free的有效成分是单一的两性高分子氨基酸衍生物，不含任何其它冷冻保护成分。这种高分子化合物不会渗透细胞。低温冷冻时，它通过吸水，一方面导出细胞内的水分子，另一方面在细胞膜外形成保护层，抑制冰晶形成和生长，从而避免细胞受到冷冻损伤。值得一提的是，该成分是天然化合物，可被细胞和机体代谢为氨基酸，不会产生毒副作用。
我们经过反复实验证明，LiveCyte® DMSO-free完全可以替代经典的DMSO冻存技术。无DMSO、无动物源/人源成分的冻存液将可以避免DMSO对细胞功能和人体的潜在危害，避免潜在的动物源感染，并且质量稳定可控。因此，LiveCyte® DMSO-free是一款非常适宜于临床使用的细胞冻存产品。另外，我们竭力研发省时、省力的细胞冻存产品。使用时，LiveCyte® DMSO-free比经典的DMSO冻存液更便捷，可节省大量时间，也不需要添购其它冻存装置，可减少不必要的资金投入。
典型产品与功能
LiveCyte® DMSO-free冻存效果能够达到经典的DMSO冻存液。
使用说明书
LiveCyte®DMSO-free细胞冷冻液的有效组分为氨基酸衍生物，成分简单明确，不含DMSO、不含任何人源或动物源成分。
DMSO是常用的渗透性冷冻保护剂，使用广泛。但某些类型的细胞对DMSO敏感，使用含DMSO的细胞冷冻液可能会影响细胞的功能，尤其是干细胞。临床上直接使用经DMSO冻存的细胞会引发呕吐和腹泻，还会造成神经系统、呼吸系统等组织损伤。
使用方法：
检查并确认细胞没有真菌、细菌、支原体污染。
2. 冻存前的细胞处于对数生长期最佳。
3. 计数待冻存的细胞数量。悬浮细胞应180g离心5~10min后除去培养基，贴壁细胞应消化后计数，再离心除去培养基。
4. 计算应使用的LiveCyte® DMSO-free体积。首先确定细胞冻存密度（可用密度为2~40×106/ml，最佳密度为4~20×106/ml）。
5. 吸取适量LiveCyte® DMSO-free，重悬细胞，立即0.5ml/管分装至细胞冻存管（可冻存体积为0.2~1ml/管，最佳体积为0.5ml/管）。
6. 立即将冻存管移入-80℃低温冰箱，不能采取任何程序降温措施或使用程序降温装置。如果无法立即移入-80℃低温冰箱，至少应当先移入0℃以下环境中（如-20℃冰箱）短暂存放10min左右，同样不能采取程序降温。冻存液重悬后的细胞不能在室温或2~8℃静置超过10min以上。
7. -80℃冰箱过夜后的冻存管，要立即移入液氮中储存，不可于-80℃长期冻存。
8. 复苏时，先准备室温或37℃预温的基础培养基，再37℃水浴冻存管，不断轻摇，待剩余1粒米大小的冰块时，迅速移出水浴。然后按1：15~1：30稀释比例，立即用基础培养基稀释融化的细胞悬液，接着180g离心5~10分钟，再重悬细胞使用。
9. 本品仅供研究使用。
