病毒和噬菌体载体的基本介绍
病毒主要有DNA(或RNA)和外壳蛋白组成,经包装后成为病毒颗粒。通过感染,病毒颗粒进入宿主细胞,利用宿主细胞的合成系统进行DNA(或RNA)复制和壳蛋白的合成,实现病毒颗粒的增殖。把感染细菌的病毒专门称为噬菌体,由此构建的克隆载体则称为噬菌体克隆载体。
噬菌体作为载体,可插入长10～20kb甚至更大的一些外源DNA片段,又由于噬菌体有较高的增殖能力,有利于目的基因的扩增,从而成为当前基因工程研究的重要载体之一。
野生型的噬菌体必须经过改造,才能成为比较理想的基因工程载体。噬菌体中首先被改造成为载体的是λ噬菌体,此外还有单链噬菌体载体、黏性质粒载体等。λ噬菌体由头和尾构成,其基因组是长约49kb的线性双链DNA分子,组装在头部蛋白质外壳内部,其序列已被全部测出。λ噬菌体感染时,通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌,而将其蛋白质外壳留在菌外。DNA进入大肠杆菌后以其两端12bp的互补单链黏末端环化成环状双链,可以两种不同的方式繁殖：溶菌性方式(lytic pathway)和溶源性方式(lysogenic pathway)。λ噬菌体含有线性双链DNA分子,其长度为48502bp。两段各有由12个核苷酸组成的5’端凸出的互补黏性末端,当λDNA进入宿主细胞后,互补黏性末端连接成环状DNA分子,连接处称为cos位点。
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