Hanks液、TBS与PBS
Hanks液的配制方法
甲液：Na2HPO4•2H2O 0．06克 KH2PO4 0．06克 MgSO4•7H2O 0．20克葡萄糖 1．00克 NaCl 8．00克三蒸水 750毫升
乙液：CaCl2 0．14克三蒸水 100毫升
①将乙液徐徐加入甲液中。②将0．35克NaHCO3溶解在37℃ 100毫升三蒸水中。③用数滴NaHCO3液溶解0．02克酚红。④将②、③液移入①液中。⑤用三蒸水定容至1000毫升，充分混匀，4℃冰箱过夜。⑥滤过消毒，小瓶分装，冷藏。
注意：酚红对细胞有一定毒性，目前实验中的用量除0．02克外，还有0．01克和0．005克，也有BSS液中不加酚红的。酚红量不同，BSS颜色也不同。
TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液
Tris缓冲盐水（TBS）：10mmol/L，Tris含0.9%NaCl，用1N HC1调pH至7.4
TRISbuffer：三羟甲基氨基甲烷缓冲液
TRISdiluent：三羟甲基氨基甲烷稀释液
Hanks液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hanks液则是无钙镁离子的Hanks液。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在BSS中可生存几个小时。 胰蛋白酶(胰酸)溶液是一种常用的细胞消化液，原代培养时用于处理组织块，使细胞分离下来。传代时用胰蛋白酶使培养细胞离开所贴附的培养瓶表面，并分散成单个细胞。胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏，呈白色粉末状，易潮解，应在低温干燥处保存。胰酶的活力常用一份胰酶解离酪蛋白的份数表示，常用胰酶活力为1：125或1：250。本实验室一般用1：250(GRC公司生产)。胰蛋白酶对细胞的分离效果与细胞的类型、特性和瓶壁表面特性有关。一般来说浓度大、温度高(勿高于37℃)、作用时间长，则对细胞分离能力大。但超过一定程度会损伤细胞，导致细胞传代后不能贴壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃时消化能力最强。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清会降低胰酶活力，所以配制胰酶时须用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。当消化结束时，可加入少量血清或含血清的培养基以终止胰酶作用。 细胞传代使用的胰酶浓度是0．25％或0．2％。用于原代细胞培养消化组织块则为0．1％或0．125％。
PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是
1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、
2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及
3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），
其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。
如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）。
无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（0.15Mol/L PH 7.2）
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g
（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）
KH2PO4 0.2g
将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
Tris
分子式: (HOCH2)3CNH2
分子量.: 121.14
(1) 规格:
外观：白色结晶
含量：≥99.5 %
熔点：168-172℃
水不溶物：≤0.01%
强热残份：≤0.05%
重金属(as pb)：≤5PPM
干燥失重：≤0.2%
吸光度(260nm)：≤0.2
PH(0.1mol/L, 25℃)：10.0-10.8
Fe：≤1PPM
SO42+：≤5PPM
别名: 三羟甲基氨基甲烷; 2-氨基-2-羟基-1,3-丙二醇; 氨丁三醇; 缓血酸铵; 三甲醇氨基甲烷;
Trishydroxymethylaminomethane;
2-amino-2-hydroxymethylpropanediol; THAM; TRIS; tris base; Tris buffer;
free base; Tris(hydroxymethyl)methylamine; Trizma; trizma base;
Trometamol; Tromethamine; Tromethane
Usage: 用作缓冲剂。Tromethamine is
used as an intermediate for the preparation of surface active agents,
vulcanization accelerators, and pharmaceuticals, and used as a
titrimetric standard.
