高效液相色谱仪选择缓冲盐的注意事项
在高效液相色谱中,酸碱缓冲液的分离对保持流动相的恒定ph值和提高保留时间的重现性具有重要意义。
怎么选择缓冲液:
Pka和缓冲容量
溶解度
紫外吸光度(使用UV检测器)
挥发性(MS蒸发光散射检测器)
离子对性质
稳定性和仪器的兼容性
根据上述理论流动相缓冲能力取决于缓冲盐的pKa缓冲盐浓度和流动相pH。
当缓冲溶液中两种溶质(ha和a-)的浓度相等时
也就是说,当缓冲盐的pKa等于流动相pH的pKa时,缓冲能力是的流动相ph值与缓冲盐pka值相差越大缓冲盐的缓冲容量越小,因此缓冲PKA和移动相的ph值不超过1.0单位。
高效液相色谱流动相的缓冲容量一般与缓冲液的浓度成正比,通常在5-25mmol/L范围内。
样品在流动相中的溶解可以避免在反相层析过程中缓冲能力的问题,特别是当流动相缓冲剂的浓度低或注入的样品量大的时候。
当缓冲容量较低时可以从以下几个方面调整缓冲容量:
减小缓冲液的PKA值与流动相的pH值之差(调节缓冲液的pH值或改变缓冲液的pH值)。
大矿物流动相的ph值和pka值的差异(当差异足够大时,溶质时间完全电离或保持非电离形式,缓冲液不重要)
增加缓冲液浓度
减少样品进样体积
调整样品的ph值,使其与流动相一致。
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