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糖脂化合物的分离纯方法介绍

2022.9.27

大孔吸附树脂法

大孔吸附树脂法主要用来样品的粗分离,获得的产物是糖脂混合物,很难得到单一化合物。例如曹东旭等以鲤鱼鱼头糜为糖脂原料,将90%乙醇萃取物用H P-20大孔吸附树脂进行分离,分别用90%的乙醇和氯仿洗脱,得到的90%乙醇洗脱液物再用HP-20大孔吸附树脂进行分离,依次用70%的乙醇和95%的乙醇洗脱,将95%乙醇的洗脱液收集、浓缩,即为糖脂浓缩物质。


高效薄层层析法

Murakami等以泰国中草药酸橙的新鲜叶子为原料,将得到的乙酸乙酯萃取相,进行葡聚糖凝胶C-100柱层析,洗脱剂为丙酮浓度依次提高的丙酮/甲苯溶液,得到60-80%的丙酮洗脱物。然后,将洗脱物进行反相硅胶柱层析,依次以甲醇/水(9:1,v/、r)、甲醇/乙腈/水(16:4:5,v/v~)为洗脱剂,得到含甘油糖脂DLGG和LPGG的混合物,进一步进行高效薄层层析制备硅胶板分离,得到甘油糖脂单体DLGG和LPGG。高效薄层层析要分离得到糖脂单一组分通常需要大量反复提取,而且提取量少,很难满足糖脂结构鉴定和生物活性的进一步研究。


柱层析色谱法

近年来,柱层析色谱柱法是糖脂分离广泛采用的一种分离方法。例如Chia-Chung Hou等,以民间昭和草为原料,将乙酸乙酯萃取相,以氯仿.甲醇为洗脱剂,进行正向硅胶柱层析得到分馏物8,取分馏物8再次进行C18反相硅胶柱层析,以95%甲醇为洗脱剂,得到富含亚麻酸的甘油糖脂成分。

柱层析色谱法虽然可以大量的处理样品,但是存在不可逆吸附严重、分离效率低、耗时长且溶剂消耗量大等缺点。

由于同一类糖脂间的差别仅仅体现在酰基脂肪酸组成的不同,分子带电性、分子极性等性质非常接近,用现有的方法很难把单个糖脂从混合糖脂中大量分离出来。所以,从化学品市场上无法购买到完全单一的天然标准糖脂,各大化学品公司以及专门提供脂类标准品的公司都仅仅能提供TLC级别的混合糖脂标准。而只有将混合糖脂中每一个成分的含量结构研究清楚,才能使有关研究(如生物活性)更为深入。因此有必要寻找一种能耗低、分离效率高、大量提取糖脂单一组分的新方法,才能适应于神经生物学研究及临床应用研究的需要。


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