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三黄片的鉴别及含量测定

2023.6.07

　　鉴别方法

　　(1)取本品，置显微镜下观察：草酸钙簇晶多破碎，直径20～140μm。

　　(2)取本品5片,除去糖衣，研细，加甲醇30ml，加热回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥＢ)试验,吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－丁酮－甲酸－水(10:7:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

　　(3)取[鉴别](2)项下的供试品溶液5ml，蒸干，残渣加水15ml搅拌使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节PH值至1～2，用醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥＢ)试验，吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

　　(4)取[鉴别](2)项下的供试品溶液5ml，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，置热水浴中加热30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次10ml，合并乙醚提取液，挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取大黄酚、大黄素对照品，加甲醇制成每1mg中各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出,晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。

　　 [鉴别](2)项下的供试品色谱，置紫外光灯(365nm)下检视，在盐酸小檗碱所显斑点的上方位置，不得显持久的蓝紫色荧光斑点。其他应符合片剂项下有关的各项规定。[2]

　　含量测定

　　照高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶（85：15）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备分别精密称取大黄素和大黄酚对照品适量，加无水乙醇-醋酸乙酯（2：1）制成每1ml含大黄素0.01mg、大黄酚0.025mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，精密称定，研细（过三号筛），精密称取适量（约相当于1片的重量），置锥形瓶中，精密加乙醇25ml，密塞，称定重量，置水浴上加热回流1小时，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-盐酸（10：1）溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用氯仿强力振摇提取4天，每次15ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-醋酸乙酯（2：1）溶解，移置25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。[3]

三黄片

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