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分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

DNA 污染的洗脱后去除实验

2019.3.28

述方案是 Dilworth 和 Huang 方案的修改（DilworthandMcCarey1992;Huangetal.2000)。它可以用于从大多数商用试剂盒和试剂制备的 RNA 中去除 DNA 污染。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

试剂、试剂盒

EDTADNA 酶ⅠDNA 酶Ⅰ缓冲液RNA 样品

仪器、耗材

水浴锅

实验步骤

一、材料

1. 缓冲液、溶液和试剂

用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水

EDTA,25 mmol/L

2. 酶和酶缓冲液

DNA 酶Ⅰ, 扩增级（无 RNA 酶）

DNA 酶Ⅰ缓冲液，10X

3. 核酸和寡核苷酸

RNA 样品

4. 特殊设备

水浴，预设为 65°C

二、方法

①向一无 RNA 酶的管中加下列成分。

RNA                                                 不多于 80ug

DNA 酶 I 缓冲液，10X                     1ul

DNA 酶 I(lU/ul)                                 1ul

用 DEPC 处理过的水将总体积调到 10ul。

②室温下温育 15 min。

③加 1ul25 mmol/L 的 EDTA 溶液，并于 65°C 加热 10min 以灭活 DNA 酶 I。

用这种方式处理的样品适合直接用于 RT-RCR。


dna
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