1. 准备透析袋
市售的透析袋含有化学杂质。为了除去这些杂质,通常要用 10 mmol/L 碳酸氢钠(NaHCO3/1 mmol/L EDTA 溶液煮沸透析袋 30 min。有人建议进行更多的处理。煮沸之后,应该用双蒸水充分洗涤透析袋。洗毕,在贮存于 1 mmol/L EDTA 溶液中,以防止微生物的污染。每隔半年必须制备新的透析袋。Spectrum(公司)提供了一系列透析膜(Spectra/Pro 7),这种透析膜由再生的纤维素经处理后制成,已经除去了重金属和硫化物。
2. 在透析袋的一端打两个死结;
3. 用移液管或漏斗将蛋白质溶液移入透析袋内;
4. 在透析袋的另一端打两个死结并将器其放入 10 倍蛋白质溶液以上体积的缓冲液中,用磁力搅拌器缓慢搅拌以促进溶液交换。透析数小时后,透析达到平衡。透析缓冲液需要更换数次,使原有缓冲液成分逐渐减少。
5. 透析缓冲液
为了浓缩蛋白质,透析袋应放入 20% 聚乙二醇或 5% 或乙二醇缓冲液中。然而,在使用 PEG 时,经常伴随有杂质进入透析物中,而需进一步的纯化处理。浓缩蛋白质溶液,较为迅速的方法是在 4℃ 将透析袋埋入 Sephadex G-100 或 G200 树脂中,3 h 后蛋白质溶液可浓缩 5 倍。 展开 |