Omega胶回收流程
实验概要
Omega胶回收试剂盒中文说明书(E.Z.N.A. Gel Extraction Kit)。
主要试剂
1. 调节水浴的温度为55-65°C。
2. 按下表用无水乙醇稀释SPW Wash Buffer，并于室温保存。
D2500-00，D2501-00: 加入20ml无水乙醇
D2500-01，D2501-01: 加入100ml无水乙醇
D2500-02，D2501-02: 每瓶中加入100ml无水乙醇
实验步骤
1. 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段，推荐使用新鲜的TAE/TBE Buffer和新配制的胶。
2. 片段完全分离后，在紫外灯下迅速切取所需条带，DNA在紫外灯下爆光时间不超过30s。
3. 称取凝胶块的重量，按照每1g凝胶加入1ml Binding Buffer对应量，加入适量体积的Binding Buffer，55-60°C水浴至凝胶完全溶解(约7- 10min)。每隔2- 3min振荡一次。
注意: 当Binding Buffer完全溶解凝胶后，请注意溶液颜色的变化。如果溶液颜色已经变成紫色或红色，必须加入5ul 5M NaAc， pH5. 2至溶液中调整pH值。
4. 把HiBind DNA柱子套在2ml收集管。
5. 将DNA/凝胶混合液转移至套在2ml收集管的HiBind DNA柱子中，10，000xg离心1 min。
6. 倒去滤液，把柱子装回收集管中。HiBind柱一次能装700ul溶液，若混合液超过700ul，每次转移700ul至柱子中，然后重复5- 6步骤。
7. 把柱子重新装回收集管，加入300ul Binding Buffer，按上述条件离心，弃去滤液。
8. 把柱子重新装回收集管，加入700ul SPW Wash Buffer，按上述条件离心，弃去滤液。
注意：使用前SPW Wash Buffer必须用无水乙醇稀释。
9. (可选)重复步骤8一次。
10. 弃去滤液，把柱子重新装回收集管， 13，000xg离心空柱2min以甩干柱子基质。
11. 把柱子装在干净的1.5ml离心管上，加入30-50ul 65°C预热的Elution Buffer到柱子基质上，室温静置2min。≥13，000xg离心2min洗脱出DNA。
