原代细胞核仁的制备
试剂和器材:
1. 悬浮缓冲液:0.34mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl,pH7.5;
2. 密度阻滞溶液:0.88mol/L蔗糖、0.05mmol/L MgCl2、10mmol/L Tris-HCl,pH7.5;
3. 按要求向溶液中加入蛋白酶抑制剂;
4. 吊桶式低温低速或高速离心机;
5. 超声发生器;
6. 光学显微镜(相差或普通光学显微镜);
实验方法:
所有操作须在0—4℃完成。
1. 将纯化的原代细胞细胞核溶于悬浮缓冲液中;
2. 超声处理悬液10—15s,中间间隔30—40s;
3. 用1g/L美蓝染色,通过相差或普通光学显微镜监测核的破裂。通常原代细胞细胞核完全破裂需要40—60s的超声处理;
4. 在离心管中,将超声处理物加入到一半体积的密度阻滞溶液上,2000g离心20min并收集核仁沉淀;
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