转氨基作用（纸层析法,Paper Chromatography）
一．目的
了解动物组织的转氨基作用，学习转氨基反应产物的纸层析鉴定方法。
二．原理
氨基酸在体内分解代谢的主要方式是脱氨基作用。脱氨基作用的主要方式有氧化脱氨基、转氨基、联合脱氨基及非氧化脱氨基。转氨基是指在转氨酶的催化下，氨基酸的 α-氨基与α-酮酸的α酮基的互换反应。转氨酶广泛分布于动物体的各器官组织中，各种转氨基作用都有专一的转氨酶催化。
本实验将谷氨酸和丙酮酸与肝匀浆一起保温，在肝细胞的丙氨酸转氨酶催化下产生丙氨酸。利用纸层析法鉴定丙氨酸的存在，证明组织内的转氨基作用。为了防止底物丙酮酸被组织中其它酶所氧化或还原，可加碘乙酸（或溴乙酸）抑制糖的酵解作用和氧化作用。
结果： 丙氨酸和α酮戊二酸 没有反应产物
用纸层析法鉴定转氨基产物丙氨酸的存在与否。原理为：谷氨酸和丙氨酸是理化性质不同的两种氨基酸，前者为亲水性氨基酸，后者为疏水性氨基酸，据此二者在固定相（水）与流动相（酚试剂）中的分配程度不同，因而流速不同。最后用茚三酮显色。
三．材料
（一）仪器 试管；离心管；离心机；剪刀及镊子；培养皿；表面皿；毛细管；喷雾器；吹风机。
（二）试剂
1．0.1%丙氨酸溶液
2．1%谷氨酸溶液
3．1%丙酮酸钠溶液
4．0.25%碘乙酸溶液
5．0.01 mol/LpH7.4磷酸缓冲液
6．0.1%茚三酮乙醇溶液
7．层析溶剂（酚的饱和水溶液）
四．方法
（一）肝匀浆的制备 取新鲜动物肝脏1克，置研钵中剪碎，加细砂少许，5ml预冷的0.01 mol/LpH7.4磷酸缓冲液，研磨成匀浆。
(二)转氨基反应
1．取小试管2支，分别标明测定和对照，各加肝匀浆10滴，将对照管立即置沸水浴中10分钟，取出冷却。
2．两管各加1%谷氨酸10滴，1%丙酮酸钠 10滴，0.25%碘乙酸5滴，置40℃水浴中保温30分钟后取出。
3．两管各加5%三氯醋酸2滴，置沸水浴中5分钟（2000rpm），将上清液分别移入同样编号的小试管中备用。
（三）层析验证
1．取直径13cm圆形滤纸一张，用铅笔过圆心作两条相互垂直的线，在每条线上距圆心 1cm处打点作记，作为点样处，并分别在其边缘标上测、谷、对、丙字样，见图9。
2．用毛细玻璃管分别蘸取测定液、1%谷氨酸溶液、对照液、 0.1%丙氨酸溶液各一小滴，在滤纸上相应点样处点样2μl，点样斑点的直径不超过3mm。
3．用大头针在滤纸圆心扎一小孔（约1mm直径），另取滤纸条（0.5×2.5cm），卷成筒状，捻紧如灯芯，从滤纸上相应点样背面插入小孔，突出滤纸面约1cm。
4．加约2.5ml层析溶剂于直径为5cm的表面皿中，表面皿放在直径为10cm培养皿正中，将滤纸平放在培养皿上，使滤纸芯浸入层溶剂，取另一同样大小的培养皿反向盖上。层析溶剂沿滤纸芯上升到滤纸，并向四周扩散，待溶剂前沿距滤纸边缘1.5cm时，即可取出（层析时间约50分钟）。用铅笔划出溶剂前沿后，用吹风机或电炉烘干。
5．显色 将滤纸平放于培养皿上，喷雾0.1%茚三酮乙醇溶液，再用吹风机或电炉烘干。观察层析出现的弧形紫色斑，并用铅笔描出。计算各色斑的Rf值。
注意事项：操作中接触滤纸前要洗手擦净，并尽量避免手与滤纸中间部位接触。
