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色谱那些事(第三期):氨基柱的使用

2019.1.30

  “色谱那些事 ” 回顾:硅胶基质和聚合物基质色谱柱的保存色谱柱对液相系统的要求

本期内容:氨基柱的使用

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  氨基柱简介

  氨基柱,全称氨丙基键合硅胶色谱柱,色谱柱家族中最灵活的色谱柱,不仅可以用于正反相还可以应用于离子交换(弱阴离子交换柱)中。

  氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团更容易水解,特别是当你的使用条件是反相条件下时,要特别注意控制pH值范围,pH值越低越有发生水解的危险;

  流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险(建议水比例不超过40%)。

  提示:在使用后以及准备长时间放置该柱时,必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。

  氨基柱的活化

  对于新氨基柱,首先应详细阅读使用说明书,了解柱子出厂保存溶剂。一般出厂会保存在正相溶剂中,如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不互溶,请先用异丙醇过渡。过渡过程中应注意异丙醇粘度较大,会导致柱压很高,应使用小流速过渡。

  当使用反相模式时,用前请使用异丙醇小流速过夜平衡色谱柱。流速建议0.1-0.2mL/min,之后再转换到100%乙腈冲洗20柱体积,然后转换到和流动相相同比例的不含盐的乙腈水体系冲洗20柱体积。

  当使用正相模式时,如与出厂保存溶剂互溶,可使用流动相直接冲洗20倍柱体积;如不互溶请用异丙醇过渡。

  氨基柱的冲洗及保存

  简单来说,正相条件下使用的氨基柱参照硅胶柱的清洗方法;反相条件下使用的氨基柱参照C18的清洗方法。

  正相使用时,将柱子冲洗干净后,用正己烷-乙腈(99:1)保存(即出厂模式)。

  反相使用时,如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;长期不用时需用异丙醇置换然后保存在正相模式下(即出厂模式)。

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