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细胞增殖生长方面实验_细胞计数法

2019.4.05

实验方法原理	细胞计数法：细胞计数法是测定细胞绝对增长数值常用最简便的方法。一般过程为接种21 孔/24 孔板细胞（如用培养瓶时则21 瓶）。分7 组，每组3 孔（或瓶），培养一周，期间逐日检测一组，计数。把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。
实验材料	细胞
试剂、试剂盒	胰蛋白酶
仪器、耗材	培养瓶恒温箱试管细胞自动计数器
实验步骤	1. 悬液制备取待测生长状态良好细胞，增长至接近汇合时，向培养瓶内加1 ml 0.25 %胰蛋白酶液，37 ℃温箱中消化，至细胞接近脱离瓶壁前吸出消化液、加新的培养液、轻吹打制备成细悬液、计数； 2. 接种向每孔中接种等量细胞，置温箱中培养；把培养瓶中营养液倒入试管中并记录下毫升量； 3. 计数检测从次日起，即开始检测第一组每个孔（或瓶）中的细胞总数，用计算盘或用细胞自动计数器计数，取3 个孔的均值，如此至第7 组结束； 4. 绘图用座标图纸绘成生长曲线。展开
注意事项	1. 计数法简便易行，但不够精确，约有20 %～30 %的误差。为提高准确性，每孔也应计算2～3 次，则总和每组计算总次数达6 次～12 次，均值可能更为精确。 2. 细胞数量增加 1 倍的时间称倍增时间，亦可从细胞生长曲线中测知。
其他	细胞增殖生长力是判定细胞活力的重要指标，有多种显示方法，除实验的细胞计数法之外，还可以进行细胞分裂指数的测定。细胞分裂是细胞增殖的方式，能比较确切地反映细胞增殖度。细胞分指数是指被测细胞群每 1000 个细胞中的分裂细胞数(分裂细胞/1000)，用以表示细胞增殖旺盛程度。因此在检测中需观察和记录群体中 1000 个细胞中的细胞分裂相数。细胞被制成分散的悬液后，以低密度(2～5 个细胞/cm2)被接种到底物上，贴壁并能存活生长形成细胞小群(克隆)的细胞百分数值称接种存活率，用以表示细胞群的活力。由于检测接种存活率时是借观察克隆(通常为 16～50 个细胞)形成情况，又因每个克隆都来自一个细胞，因此也称克隆形成率。细胞接种存活率与细胞活力成正比。近年流式光度仪的发展已成为检测细胞增殖周期主要手段，可进行多项柱测，如细胞周期时相、DNA 合成强度、持续时间等，效果极好，已取代了应用同位素等繁琐方法。培养细胞是非常适用于做流式细胞仪检测的对象，程序简单、怏速、效果准确。流式细胞仪除能检测细胞周期时相变化和反应 DNA 合成情况外，也可借以了解染色体倍性；另外尚可结合荧光免疫法对细胞膜进行分析等。来源《组织培养和分子细胞学技术》（北京出版社）展开