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巧克力平板制备实验

2019.4.12

实验方法原理	主要是蛋白胨和牛肉粉用来提供细菌生长所需的碳源、氮源、氨基酸以及维生素。氯化钠维持培养基中的渗透压，琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血提供氯化血红素和辅酶I，为嗜血杆菌属的生长提供特殊营养。巧克力平板培养基还能够培养其他细菌，主要的原因是血液中有V、X因子，这两种因子是位于红细胞中的，一般细菌不能利用，轻微的加热（一般为75~85摄氏度左右）使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。
实验材料	脱纤维羊血或兔血
试剂、试剂盒	蛋白胨牛肉粉氯化钠琼脂蒸馏水
仪器、耗材	玻璃平皿量筒高压蒸气锅 pH计 85℃水浴锅超净工作台称量天平
实验步骤	一、巧克力平板主要成分 1. 以羊血制备蛋白胨 10g 牛肉粉 3g 氯化钠 5g 脱纤维羊血 50mL 琼脂 15g 蒸馏水 1000mL 2.以兔血制备鲜牛肉浸出液 1000mL 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 脱纤维兔血 100mL 琼脂 15g 二、巧克力平板制备 1. 将除脱纤维羊血（兔血）外的主要成分混合，校正pH在7.2——7.4，高压灭菌后，冷却至85℃。 2. 无菌方法加入脱纤维羊血（兔血），摇匀后置于85℃水浴中，维持该温度10分钟，使之成巧克力色。 3. 取出，置于室温冷却至约50℃，倾制平板。展开
注意事项	1. 外观：巧克力平板培养基应为巧克力色固体，表面平整，不得有裂痕。且培养基不得有肉眼可见气泡及肉眼可见物（但允许有少量肉眼可见纤维）。 2. pH值应在7.2±0.2。 3. 无菌要求：将巧克力平板培养基置于37℃±2℃培养箱中培养7天，不得有菌生长。
其他	本实验来源于牡丹江医学院检验专业实验指导