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毛细管电泳分离条件选择流程

2018.4.02

分离条件的选择是毛细管电泳中最重要但也是最难之处。不同的专业研究工作者可能会有各自不同的选择策略和流程,我们提出如下九步选择流程,仅供参考:
第一步,尽可能多地了解分离样品的类型、来源、组成及其性质;
第二步,根据样品的可能性质和来源,选择分离模式,若无样品信息可先选CZE;
第三步,根据样品性质确定检测方法,一般先选直接紫外吸收;
第四步,确定样品处理方式,包括衍生方案以及离心过滤除蛋白等;
第五步,根据样品解离常数计算最佳pH,或利用75µmID毛细管和磷酸缓冲体系确定pH范围;
第六步,根据所需pH构建缓冲体系,包括进一步优化pH、缓冲试剂浓度等;
第七步,优化其他操作参数,如毛细管尺寸、分离电压和温度等;
第八步,确定是否需要使用添加剂和使用非水溶剂;
第九步,确定是否需要换用其他分离模式。

在毛细管电泳条件选择中,还应充分注意下列操作事项:
①最好对样品和缓冲液进行过滤或离心处理。
②毛细管的洗涤或平衡,与缓冲体系、pH以及柱子有关。磷酸根与石英和玻璃之间存在慢相互作用,需要延长平衡或冲洗时间,处理的时间应由分离重现性决定。
③欲降低缓冲液的电导,应尽量使用所谓的“生物缓冲试剂”;欲降低检测背景,则应尽量使用无机缓冲试剂。
④欲保持分离重现,要尽量采用相同的条件,包括毛细管、缓冲液、温度、电压、洗涤等。

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