关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

用质谱数据对肽段从头测序实验

2020.8.17

实验方法原理 单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列,即相邻肽段间相差一个氨基酸残基,用质谱分析肽阶梯,通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱,但碎片离子由人工完全解析。

用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生,由 C 未端或N未端断裂。测定N末端序列的化学方法应用Edman化学反应,用MS或 MS/MS 读出产生的变短的肽。这一方法通常被称为“阶梯测序'。在这种方法上发展了两种变化方式。

实验材料 蛋白样品

仪器、耗材 质谱仪

实验步骤

第一种方法是任每一测序循环开始时,在多肽/蛋白质底物内加 Edman 试剂,每一个循环中有一小部分的底物袚 N 末端封闭,末端封闭后的肽在下一个循环中不会参加反应,这祥就产生了序列阶梯,最终反应产物混合物经 MALDI-MS 分析,其质量数之差反映了氨基酸残基的质量数。


推荐
关闭