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如何验证抗体参数，确保特异性，选择性和重复性？

2020.4.10

你有没有从抗体供应商那里订购过抗体？你遇到过抗体特异性，选择性和重复性出问题吗？你是否曾将抗体退回给供应商，却收到另一份劣质产品吗？如果你对上述问题的回答是肯定的，那么你也遭受过“坏”抗体的毒害。

据估计，所有购买的抗体中约有50％是“坏的”，仅在美国就浪费了约3.5亿美元。研究人员可以使用的仅供研究（RUO）使用的抗体超过400万种，因此记住两件事是重要的：选择好的厂家；尽可能在实验室做交叉验证。在本文中，我们讨论的就是如何验证购买抗体的参数（即选择性，特异性结合/解离速率，平衡常数），以确保你获得高质量抗体，从而节省你的时间和金钱。

三种类型的抗体

在抗体领域，有三大类抗体：多克隆，单克隆和重组抗体。多克隆和单克隆抗体由免疫系统中的记忆B细胞产生，其分泌抗体应对外来抗原。多克隆抗体具有识别和结合相同抗原上的不同表位的能力，而单克隆抗体识别并结合抗原上的单个表位。这些抗体类别之间的主要区别在于它们的特异性：单克隆抗体是高度特异性的，而多克隆抗体更可能发生交叉反应，从而降低特异性。值得注意的是，重组抗体（即通过DNA重组，表达，纯化等在体外产生）表现出与单克隆抗体相似的方式，但具有许多生产优势，包括快速生产，更快的周转时间和不需要宿主动物。理论上，重组抗体技术将成为主要的抗体生产方法（Bradbury，A.，＆Plückthun，2015）。

虽然许多抗体生产商和抗体分销商提供了分析证书（CoA），Western blot和/或ELISA数据，但有些公司不提供此信息，因此保持警惕，成为聪明的消费者和明智地选择抗体是非常重要的。此外，许多使用Western blot或ELISA等技术验证抗体的生产商就声称抗体适用于多种应用（如IHC或流式），但没有支持性文件；如此便出现实验室抗体质量难保证的危机。验证购买抗体的参数，如选择性，特异性，序列数据和结合/解离率以及平衡常数，可以让生产者承担其责任，并确保你获得高质量抗体做研究。

结合常数及表面等离子体共振技术检测的重要性

于2016年发表在Journaltical Analytical Chemistry Insights上的论文中，作者指出，由于抗体结合常数是静态特性，并且只有一小部分抗体在说明书会加上亲和力数据，“遗憾的是，很少对抗体及其抗原进行亲和常数的测定”（Weller，2016）。在该文章中，作者认为最受欢迎的表征结合常数和验证抗体质量的方法是表面等离子体共振（SPR）。还有其他可用于检测结合常数技术，但不幸的是，这些技术通常使用大量样本，需要标记，不能提供足够的信息和/或需要大量的费用。而表面等离子体共振（SPR）可获得抗体完整的动力学参数，已成为几十年来获得定量结合动力学数据的金标准。

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