卵黄抗体制备的操作方法
1.实验动物的选择：选择健康、产蛋率高的蛋鸡，购进后饲养1周左右，观察其健康情况。
2.抗原的准备：免疫抗原有多种选择，一般采用灭活的病原体，也可以选择激素类、蛋白类物质，使用前可以选用弗氏完全佐剂乳化抗原。
3.动物免疫：免疫方式主要有口鼻接种、皮内接种、皮下接种、肌肉注射、腹腔注射以及静脉注射。禽类的免疫方式多用肌肉注射，接种中采用胸肌多点注射。使用弗氏完全佐剂充分乳化抗原。以商用鸡新城疫灭活苗免疫为例，首次免疫的剂量可以控制在1~2 mL，抗原含量为0.3-0.5 mg/kg（30日龄的蛋鸡免疫剂量为0.4 mg/次）2周后进行2次免疫，4周后第3次免疫之后每隔1个月可加强免疫1次。
4.免疫鸡血清抗体效价检测：一般使用琼脂免疫扩散实验检测免疫鸡血清中的抗体效价。将免疫蛋鸡所用的抗原滴加于抗原孔，免疫鸡血清滴加于抗体孔。抗原孔与抗体孔之间出现沉淀线者，为阳性。最高稀释倍数血清孔出现沉淀线，即为该血清的抗体效价。一般效价达到1:64以上时，可开始收集免疫蛋鸡所产鸡蛋。
5.收集卵黄抗体：先用清洁水洗去蛋壳表面的粪污，再使用碘酊和酒精消毒。无菌条件下打开胚壳，倾出蛋黄至灭菌大烧杯中，以1:9的比例加入灭菌生理盐水或0.01 mol/L pH7.2 PBS稀释并充分混匀，调节pH至5.2，匀浆后的卵黄抗体可以进一步提纯，也可加入0.01%硫柳汞或每毫升卵黄液加入青霉素、链霉素各1000单位进行防腐抑菌，摇匀后分装于消毒好的瓶中，冷冻干燥保存或制成干粉利用。
6.IgY的纯化：卵黄混合液反复冻融3次，6000 r/min离心30 min，分离出卵黄蛋白，加入终浓度0.07%的海藻酸钠和0.02%的NaCl，振荡，使海藻酸钠充分溶解，静置30 min，6000 r/min离心30 min，上清液调节pH到7.2，再依次用50%、33%、3%的饱和硫酸铵（pH 7.2）提取IgY，用 SephadexG-25脱盐。
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
