PBMC细胞分离液分离原理
PBMC（peripheral blood mononuclear cell），外周血单个核细胞，顾名思义，其主要细胞类型为血液里边具有单个核的细胞，主要包括淋巴细胞（Ｔ＼Ｂ），单核细胞，吞噬细胞，树突状细胞和其他少量细胞类型。其中淋巴细胞占很大一部分。
人外周血单核细胞分离自外周血。在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念，单核细胞起源于骨髓中的造血干细胞，并在骨髓中发育。与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用。固定在组织中的单核细胞称为组织巨噬细胞，它们经常大量存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素，参与机体防卫机制。在炎症周围单核细胞能进行细胞分裂，并包围异物。
分离PBMC的主要目的是为了将多核细胞和红细胞去除，从而更方便地对外周血中的单核细胞进行研究。
// 分离原理 //
分离单核细胞常使用Ficoll作为分离液的主要成分，它是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400000，当密度为1.2g/ml时也未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分离液比重，离心后漂浮于分离液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分离液中。吸取分离液液面上的细胞，就可从外周血中分离到单核细胞，并进行之后的培养与检测。
// 试剂准备 //
实验样本（全血，未凝结）
灭菌PBS/生理盐水
人淋巴细胞分离液
// 实验设备 //
离心机（需可调制动）
超净工作台
移液器
等...
// 实验步骤（含操作要点） //
1、取全血，使用等量PBS稀释。（全血：HBSS=1:1）
2、取离心管，加入与血稀释液等量的PBS于管底，将血液稀释液小心加至PBS液面上层。（小心不要使两种溶液混合，吸头接近液面，贴壁缓慢加入，尤其是两种溶液刚接触到的时候，一定要慢！慢！再慢！）
3、离心：800g，30min，需要将制动降至最低，即离心机自然降速至0，离心完毕将得到如图所示分层（一定要自然降速，或者只有1-2成的制动）
4、吸取白膜层至新15mL离心管中。（白膜层为如图所示部位，一定要小心的吸取，不要吸到血浆和下层的分离液也不要将各层溶液搅混，吸取的时候可以先将上层血浆吸掉，这样更好操作。）
5、白膜层液体加10~15mlPBS离心，300g，10min，弃上清。沉淀再加PBS清洗一次，弃上清。
6、沉淀加入正常培养的完全培养基进行培养，2~3小时，使单核细胞贴壁。
7、镜下观察细胞贴壁后，更换培养基，去除未贴壁细胞，保留下来的即为所需的单核细胞。
