关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

分离小鼠胚胎实验

2019.4.04

分离小鼠胚胎可以用于:(1)体外培养小鼠胚胎,摸索适宜培养条件。(2)使用胚胎进行发育生物学研究。

实验方法原理

胚胎是怀孕最初两个月内的幼体。囊胚、胚的早期发育和胚胎发育是一个连续过程。在体节时期,三个胚层都发生了变化。外胚层在背部中线凹陷成沟,称神经沟,沟的两岸称神经脊。神经脊逐渐接近、愈合,致使神经演变为纵贯胚体的神经管。神经管和神经脊将来演化为神经系统。内胚层随着胚体卷曲成管状,称原肠,原肠依部位又分为前肠、中肠和后肠。

实验材料

DBSS

试剂、试剂盒

70%乙醇

仪器、耗材

培养皿尖镊子尖剪刀超净工作台本生灯

实验步骤

1. 交配。将分笼的雄鼠和雌鼠合笼进行交配,雌鼠 3 天后可进入动情期,此时交配的成功率最高。这一过程可以有计划地进行,使胚胎在适宜的时间产生。为确定成功交配的时间需每天早晨检查雌鼠的阴栓。

2. 计算胚胎发育时间:将发现阴栓的日子定为零天,胚胎发育时间由这一天开始计算。整个孕期约为 19~21 天,分离完整胚胎进行细胞培养的合适时间为第 13 天,此时胚胎已相当大,但仍含有大量的未分化的间充质细胞,这是培养细胞的主要来源。但分离、处理超过妊娠期一半的胚胎可能需要许可证(例如在英国),所以用 9~10 天的胚胎也许更可取。虽然从这种胚胎分离的组织细胞的数目相对少一些,但能够生长的细胞的比例较高。除了脑和心脏之外的大部分器官于妊娠第 9 天开始形成,11 天之前很难分离。单一器官的分离在第 13~14 天比较容易,大部分器官于第 18 天完全形成。





3. 拉颈处死小鼠(U .K Schedule I procedure),用 70 % 乙醇仔细消毒其腹部表面。



4 . 于膈膜附近的腹中线位置横向撕开皮肤,向两侧翻开皮肤,显露未接触的腹壁。





5. 用无菌剪刀沿腹中线纵行剖开, 露腹腔脏器,此时可见充满胚胎的子宫位于后腹腔。





6. 取出子宫置于盛有 10 ml 或 20 ml DBSS (取材用BSS (含有高浓度抗生素的BSS(50 ml 盛于无菌烧杯中,用于冷却烧过的器械)),装在 25~50 ml 的螺口试管或通用容器内)的 25 ml 或 50 ml 的螺口瓶内。



7. 将未处理的子宫移入培养室,转人新的培养皿中,内含无菌的 DBSS 。



8. 分离胚胎:

(a) 用两个无菌镊子撕开子宫,注意保持镊子尖闭合,以免过度破坏子宫及对胚胎施加过大压力。



(b) 将胚胎与胎膜和胎盘剥离,放在培养皿的另一边,避开血污。



9. 将胚胎转入新的培养皿中,若有大量的胚胎要取(如 4 或 5 窝以上),可将培养皿置于冰上。









展开 
注意事项

1. 将器械浸入乙醇后点燃,即对器械进行消毒时,要十分小心,同时不要将还很热的器械放回乙醇内!

2. 以上所有步骤应在组织培养室外进行,于小型超净台内快速操作将有助于保持无菌。不要把活体动物带入培养室因为活体动物可带入污染。若动物尸体需在培养室内处理,必须先浸入乙醇或用乙醇涂抹,用后尽快处理掉。

其他

胚胎的发育过程是一个极为细致复杂的过程,是细胞和组织按照一定的顺序进行分化的过程,在这个过程中任何一个环节受到干扰,就会导致各种畸形。特别是器官迅速分化发育时,最易受到致畸因子的干扰。


推荐
热点排行
一周推荐
关闭