常用贮存液的配制
实验概要
常用贮存液的配制
实验步骤
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
【配制方法】
把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3 ． 0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】
在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
4．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
5 ．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
6．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
7．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
8．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
比色杯光径为25px时,吸光度=εM
9． 0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节 溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
10． 溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
11．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节 pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
12． IPTG溶液
【配制方法】
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
13． β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
14． NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
15． 酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
16．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
17．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
18．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
19． 3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
20．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
21．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
22．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
23．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节 pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
24．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
25．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
26．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
