HPLC法检测饲料中的烟酸叶酸
方案优势
重现性良好
采用标准
GB/T17813.7-1999《复合预混料中烟酸、叶酸的测定 高效液相色谱法》
方法/原理/步骤
色谱条件
色谱柱：HitachiLaChromC18(5μm)4.6mmI.D.x250mmL
柱温：30℃
流速：1.0mL/min
波长：275nm
进样量：20μL
流动相：取500mL去离子水，加10mL冰乙酸，1.3mL三乙胺，20mL己烷磺酸钠(0.005mol/L),用去离子水定容至1L，调pH=3.2，过滤；取上述溶液850mL与150mL甲醇混合，脱气。
溶液制备
烟酸贮备液：准确称取约25mg烟酸置25mL容量瓶中，用流动相溶解并定容；
叶酸贮备液：准确称取约25mg叶酸置25mL容量瓶中，用0.1mol/L碳酸钠溶液溶解并定容；
分别移取一定量烟酸和叶酸贮备液，用流动相稀释成浓度为10μg/mL的混合标准品溶液，用0.45μm滤膜过滤，进样测定。
实验结果
1、标样测定
根据GB/T17813.7-1999的色谱条件进行实验，烟酸出峰时间为3.84min，叶酸出峰时间为30.86min，图1为混合标样的色谱图。
图1混合标样色谱图
2、重复性实验
对混合标准品溶液重复进样，烟酸6次进样峰面积的RSD为0.22%，叶酸6次进样峰面积的RSD为0.11%，重现性良好，结果见下表：
表1烟酸峰面积的重现性结果
表2叶酸峰面积的重现性结果
3、饲料样品检测
某品牌维生素预混饲料经前处理后测定，检测结果见图2。
图2预混饲料样品色谱图
结论
采用日立高效液相色谱仪Primaide四元梯度系统配紫外检测器，在上述色谱条件下，烟酸和叶酸峰面积的重现性良好；并可以对饲料实际样品中的烟酸和叶酸进行定性和定量，紫外检测器灵敏度高，适用于常规定量测定。
仪器设备
仪器
1)四元梯度泵PM1110
2)自动进样器PM1210
3)柱温箱PM1310
4)紫外检测器PM1410
5) PSM色谱工作站。
