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PCR实验室污染

2019.9.24

在众多的生物实验室中,分子生物学检测方法如PCR因其检测灵敏度高、准确度好、操作方便、快速等优势已经被广泛应用。不过正是由于它的高灵敏性,实验室中极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,所以对环境中污染源的防控也极为重要。一旦出现实验室环境污染,比如样本之间交叉污染、试剂污染、仪器污染、阳性对照污染、PCR扩增产物污染、气溶胶污染等,其中气溶胶污染是一个非常重要而被忽视的污染源。实验室出现气溶胶污染,需要较长的时间进行根除。

一、污染原因

1、样本之间交叉污染。

    标本污染主要有收集标本的容器被污染;标本存放运输时,由于密封不严或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;核酸模板在提取过程中,由于加样枪污染导致标本间污染;手动提取核酸样本时,污染的手套触摸离心管内盖导致的污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。

2、PCR试剂污染

    PCR试剂在配制过程中,移液枪、枪头、离心管等原因造成试剂被PCR核酸模板污染。

3、不同工作区域移液枪等耗材交叉使用。

    将易污染区域的移液枪、枪头、离心管等耗材拿到洁净区使用引起的污染;

4、离心机转子未定期擦拭。

    离心机通常进行各种试剂组分、不同盲样的离心,如果离心管外部沾染病毒、阳性核酸或阳性质粒,容易造成污染。

5阳性对照造成的污染。

    开盖时间过长高浓度质粒挥发到室内,阳性对照组分未使用完任意丢弃,加完阳性对照的枪头未放入消毒液中。

6扩增产物开盖造成的污染。

    这是PCR试验中最主要、最常见的污染原因。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测拷贝的极限,PCR产物开盖后,极易迅速造成扩散,极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。

7各个实验室擦桌布、扫把,簸箕,工作服交叉使用。


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