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透析胎牛血清的三大用途

2021.5.19

  一、掺入研究

  例如:有人研究呼吸道合胞病毒的宿主特异性:即为什么它只感染呼吸道上皮细胞,而不感染其他细胞。

  他们将该病毒的F蛋白(融合蛋白)序列克隆入质粒内,并转染293T细胞。转染后第20小时,细胞先在不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM+透析胎牛血清中培养了45分钟(让细胞处于饥饿状态,因培养基中缺少氨基酸),再在同样上述培养基中培养,但添加了35S标记的蛋氨酸和半胱氨酸。

  培养4小时后进行分析。即裂解细胞后,用抗F蛋白的抗体捕获F蛋白、跑胶并进行放射自显影,分析F蛋白的表达情况。发现F蛋白的表达确实增加了,但突变后的F蛋白表达却无任何变化。结果证实,野生型的F蛋白确实参与病毒对宿主细胞的侵袭。

  值得指出的是,用35S标记的蛋氨酸和半胱氨酸用来标记细胞内的蛋白,结合免疫沉淀用于观察在某一过程中发生的某一蛋白的变化,从而发现该蛋白所扮演的角色,的确是一个普遍有效的方法(在研究信号分子磷酸化的方面,则需要使用32P标记的磷酸盐)。

  在这其中,透析胎牛血清的使用必不可少,即给细胞创造一个无外源氨基酸干扰的环境。

  二、细胞水平的药物筛选

  例如:有人要从化合物库中筛选S1P4受体的拮抗剂,以抑制流感病毒带来的免疫激活导致的肺损伤。他采用报告基因进行监测。为了避免细胞培养环境中存在的小分子的干扰,他也需要用10%的透析胎牛血清加McCoy's 5A培养基来培养细胞。

  类似在药物研发过程中,采用特定启动子操纵的荧光素酶报告基因,基于细胞平台的高通量药物筛选,也都需要无外源小分子的培养体系,因而也要用透析胎牛血清。

  三、细胞克隆的筛选

  包括杂交瘤细胞和CHO细胞等,由于在进行细胞筛选时,需要无外源小分子如次黄嘌呤和胸腺嘧啶等的干扰,因此也需要用到透析胎牛血清。

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