关于盒式诱变法的基本信息介绍
基因工程技术不但可使基因产生特异性位点突变，也可以产生区域性的突变。常用的方法如盒式突变法，又称片段取代法。这一方法的要点是利用目标基因中所具有的适当的限制性内切酶位点，用人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段(这种合成的片段被称为盒)，来置换或取代目标基因中的相应序列。这种用于突变的盒可以是任意大小、任何序列，通常盒的大小与所取代片段的大小相同。利用盒式突变可以产生各种特异性的突变或突变家族，在这些突变体中各种不同的序列被集中在目标基因的一个特定区域，从而为研究蛋白质特定结构区域或特定结构域的结构和功能提供了一个切实可行的方法。
进行盒式诱变时，在目标基因序列中要有适当的限制性，内切酶识别位点，使得用以取代天然DNA序列的盒式突变序列可以有效地插入到目标基因中。然而对于一个天然蛋白质基因而言，其所含的可供利用的限制性内切酶位点相当少，影响盒式突变的操作。为了在目标基因的特定位置产生合适的酶切点，可以利用遗传密码的简并性，在不改变氨基酸序列的前提下，通过改变某些核苷酸的序列，产生合适的限制性内切酶位点 [2] 。
PCR方法和前述定点诱变方法都可引入。要求引入的酶切位点对目标基因是单一的，而且对目的基因没有影响。对于化学合成的基因或基因片段而言，可以利用密码子简并原则，在合成基因的设计阶段，就设计好合适的限制性内切酶识别位点，便于盒式突变的操作。Wells等用此法成功地在枯草杆菌蛋白酶氨基酸序列第222位上替换了10种氨基酸的残基。
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