铁蛋白的提取及纯化
铁蛋白以肝、脾含量较高，其中马脾脏含量最高，标记用的铁蛋白主要是从马脾脏中提取。马脾脏来源不便，可用市售铁蛋白相对分子质量45000。棕红色结晶。商品为4次结晶品，悬浮于饱和硫酸铵溶液中。一种结合铁离子辅基的蛋白质，它以脱铁蛋白为外壳，环绕着4个分开的羟化铁-磷酸盐，形成电子致密的结合型蛋白质。在制备的过程中，加入N，N-1，3-丙二胺偶合铁蛋白，可成为正离子化铁蛋白。密封、4℃保存。
纯化方法：①取1mL商品铁蛋白溶液，用1000mL蒸馏水或1%的氯化钠溶液透析3次，去除重结晶过程中残留在铁蛋白中的硫酸镉。 [5]
②200rpm离心10min，去除大的聚合物。
③3000rpm离心1~2h，使其形成铁蛋白小球，弃上清。
④用结合反应所用的缓冲液悬浮沉淀。
⑤马脾铁蛋白约含15%的低聚物，将铁蛋白溶液过4B柱，收集流出液，取后2/3峰再过一次4B柱，可获得98%的单体铁蛋白。
⑥用50%的饱和硫酸铵使铁蛋白沉淀。然后将沉淀溶于少量双蒸水中，通过透析去除硫酸铵。
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