小鼠肝细胞培养实验
实验方法原理 通过光镜观察细胞形态、电镜观察超微结构及检测培养上清白蛋白水平证实培养细胞为肝细胞，持续培养结果显示原代培养第6～12 d 左右为肝细胞功能最佳观察和实验阶段。
实验材料 小鼠
试剂、试剂盒 DMEMDMEM胰酶PBS
仪器、耗材 饭盒纱布小剪子小镊子大镊子大烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6 孔培养板吸管移液管手套微量加样器
实验步骤
一、实验步骤
1. 将小鼠断颈致死，置 75%酒精泡2-3 秒钟，取肝脏，置于盛有 PBS 的平皿中。
2. 剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物，转移到另一个盛有 PBS 液的平皿中。
3. 用手术剪将脏器剪成小块(大小约 1mm2)，玻片研磨，转到离心管，离心(1000 rpm，5 min)。
4. 视组织或细胞量加额加入5-6 倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化 20 分钟，每隔 5 分钟振荡一次，或用吸 管吹打一次，使细胞分离。
5. 加入3-5 ml 含血清的培养液以中止胰酶消化作用。
6. 用100 目孔径滤网滤过，除去未消化的大组织块。
7. 再次离心5 min，弃上清液。
8. 加入无血清培养液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9. 加入含血清的培养液 l-2 ml (视细胞量)，血球计数板计数。
10. 将细胞调整到5×105/ml 左右，转移至6 孔培养板中，37℃下培养。
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