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荧光分光光度计的使用

2021.6.08

使用说明(操作前必读)


1、硬件操作


荧光分光光度计在使用时,需要注意开机次序,以保护设备之间不受影响。荧光光谱仪开机顺序一般为先开氙灯,然后开仪器主机,Z后开跟仪器连接的计算机。如此操作的原因在于稳态氙灯是高压点亮,为了避免瞬问脉冲电流对周围设备造成影响,需要先开氙灯,等电流稳定后再打开周边的电脑等设备。关机顺序则相反。


2、软件操作


荧光定量分析多采用工作曲线法,即以已知量的标准物质,按试样相同方法处理后,配成一系列标准溶液,测定其相对荧光强度和空白溶液的相对荧光强度;扣除空白值后,以荧光强度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制工作曲线;然后将处理后的试样配成一定浓度的溶液,在同一条件下测定其相对荧光强度,扣除空白值后,从工作曲线上求出荧光物质的含量。


在用荧光分析法测定某些会引起荧光改变的微量物质时,常采用差示荧光法,可使荧光强度的读数差距拉大,使荧光强度的降低加大,从而提高方法的灵敏度和准确度。




荧光分光光度计操作步骤


1、开机


(1)开启计算机


(2)开启仪器主机电源按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)同时,观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来,都显示绿色为正常。


(3)双击桌面图标(FL SoluTIons 4.1 for F-7000),主机自行初始化,扫描界面自动进入


(4)初始化结束后,须预热15-20分钟,出现操作主界面(界面右下角出现Ready)


2、点击扫描界面右侧“Method”


在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelength scan”测量模式 在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数 选择扫描模式“Scan Mode”:Emission/ExcitaTIon(发射光谱/激发光谱) 选择数据模式“Data Mode”:Fluorescence (荧光测量) 设定波长扫描范围


扫描荧光激发光谱(ExcitaTIon):需设定激发光的起始/终止波长(EX Start/End WL)和荧光发射波长(EM WL)


扫描荧光发射光谱(Emission):需设定发射光的起始/终止波长(EM Start/End WL)和荧光激发波长(EX WL)


其他选项可选择默认值(也可根据具体实验要求自行设定) 参数设置好后,点击“确定”


3、设置文件存储路径(此步也可不进行参数设置,可以在按5中方法进行保存)


(1)点击扫描界面右侧“Sample”


(2)样品名可自行命名


(3)选中“Auto File”,可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据


(4)参数设置好后,点击“OK”


4、扫描测试


(1)打开盖子,放入待测样品后,盖上盖子(请勿用力)


(2)点击扫描界面右侧“Measure”,窗口在线出现扫描谱图


5、数据处理与保存


(1)选中自动弹出的数据窗口


(2)右键--“Trace”,进行读数并寻峰等操作


(3)“File”--“Save as”对数据进行保存


6、关机顺序:


(1)关闭运行软件FL SoluTIon 2.1 for F-7000


(2)选中“Close the lamp,then close the monitor windows?”点击“Yes”窗口自动关闭同时,观察主机正面面板右侧的Xe LAMP指示灯暗下来,而RUN指示灯仍显示绿色


(3)约十分钟后,关闭仪器主机电源,即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮(POWER)(目的是仅让风扇工作,使Xe灯室散热)


(4)从样品池中取出所有比色皿,清洗干净以便下一次使用


(5)关闭计算机


荧光分光光度计使用注意事项


1、在实验开始前,应提前打开仪器预热,并配制好所需的溶液,对于已经配制好的溶液,在不用时放在4℃冰箱中保存,放置时间超过一星期的溶液要重新配制。


2、在测试样品时,注意荧光强度范围的设定不要太高,以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。


3、实验所用的样品池是四面透光的石英池,拿取的时候用手指掐住池体的上角部,不能接触到四个面,清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。


4、实验结束后,要及时的清理台面,处理废液,清洗和放置好样品池,将下次要用的溶液放回冰箱,并且按规定登记实验记录,养成良好的实验习惯。


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