荧光分光光度计法测定硫酸奎宁浓度的实验方法与步骤
荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、试样量少的特点。本实验的主要目的是通过学习荧光法测定硫酸奎宁，掌握VARIAN荧光分光光度计 的使用方法以及利用荧光法进行定量分析。
一、实验目的
1.熟悉VARIAN荧光分光光度计的原理和使用
2.掌握激发光谱和发射光谱的概念及测定方法
3.掌握用标准曲线法进行荧光定量分析
VARIAN荧光分光光度仪
荧光分光光度计基本流程如图：
光谱扫描的实现:
仪器有两套光栅分光系统，根据激发和发射光栅动的形式可形成两种光谱：
激发光谱：激发光栅转动
发射光谱：发射光栅转动
荧光物质的激发光谱
固定发射光波长.以不同波长的入射光激发荧光物质,化合物发射的荧光强度F与入射光波长的关系曲线λ
2.发射光谱 (或荧光光谱 )
固定激发光波长. 化合物发射的荧光中各种波长组分的荧光强度.
二、实验原理
1.硫酸奎宁的分子 结构特征
硫酸奎宁属生物碱类抗心率失常药,其分子具有喹啉环结构,可产生较强的荧光,可直接用荧光法测定其荧光强度,由校正曲线求出回归方程进而求出试样中奎宁的浓度.
2.定量依据与方法
(1)定量依据：
在低浓度时,溶液的荧光强度与溶液中荧光物质的浓度呈线性关系
If = Kc
(2)定量方法:校正曲线法
标准曲线法：
配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度;
三、实验内容
•1.仪器和试剂:
试剂:0.1μg/ml硫酸奎宁(仪器室),
100μg/ml硫酸奎宁标准溶液,
硫酸奎宁待测液
0.05mol/l稀硫酸溶液
•2.实验步骤:
1.标准溶液的制备:
精密吸取硫酸奎宁标液(100μg/ml,0.05 mol/L硫酸溶解)1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml分别置于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀释至刻线,摇匀,制得对照品的标准系列溶液,并计算浓度.
2.待测试样溶液的制备:
吸取硫酸奎宁待测液1.0ml,于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀释至刻线,摇匀,得待测试样溶液.
3.测定:
(1)用0.1ug/ml的硫酸奎宁测定激发光谱和发射光谱:
开机—打开光谱扫描工作站--方法建立—调零--激发光谱的测定—发射光谱的测定—打印结果
(2)校正曲线法测定试样溶液的浓度:
打开浓度测定工作站--方法建立--校正曲线的测定--试样溶液的测定—打印结果--关机
注意事项：溶液配制过程中需应当规范操作各种容量仪器，防止误差；样品测定时，应该按照从低浓度到浓度的顺序，尽可能的减少测量误差；仪器校正后制作标准曲线的参数应该和测定样品时保持一致。
