布氏杆菌病分子生物学诊断技术
随着分子生物学的迅速发展出现了分子杂交技术，通过分析布氏杆菌的遗传物质而达到特异、敏感的检出和鉴定的目的。Russell等采用生物素标记牛布氏杆菌S19DNA作为探针来检测布氏杆菌病，对布氏杆菌属DNA进行分子杂交，其结果全部为阳性，证实有较高的灵敏度和特异性。近年来，国外学者运用PCR技术成功地对布氏杆菌进行了特异性扩增。结果显示：PCR对6种18型布氏杆菌均能扩增出特异性片段，而对十几种与布氏杆菌同源性高的革兰阴性菌没有特异性扩增片段，灵敏度为60-lOOfg(小于100个菌细胞)，充分说明了PCR技术用于布氏杆菌诊断的应用前景。目前研究较多的外膜蛋白(Omp)主要有2Sku外膜蛋白、36ku外膜蛋白和Omp31。
25ku外膜蛋白存在于所有的布氏杆菌中，，是绵羊种布氏杆菌和牛种布氏杆菌的主要外膜蛋白成分之一。Hilpper从牛种布氏杆菌544基因库中，以抗Omp25单克隆抗体钓出了Omp25基因，并分析了其脱氧核糖核苷酸序列。Omp25基因长约917bp，在起始密码子6个碱基前有7个核苷酸序列(TAAGGAG)与大肠杆菌16SRNA序列具有同源性，估计是核糖体结合位点。紧接着起始密码子是一段信号肽序列，与蛋白质分泌有关。
36ku外膜蛋白主要存在于牛种布氏杆菌中，是构成跨膜通道的膜孔蛋白。Ficht从牛种布氏杆菌中克隆并表达了编码该蛋白的基因，发现它由2个相邻基因Omp2a和Omp2b组成，位于牛种布氏杆菌Omp2区，2个基因具有85％的同源性，相隔900bp并相对排列。
Omp31主要存在于羊种布氏杆菌外膜蛋字校肿又柿糠植加?1～34ku。该基因长720bp，编码含240个氨基酸的蛋白。作为羊种布氏杆菌主要外膜蛋白之一，对于羊布氏杆菌病的诊断具有重要意义。
新近发展的PCR方法可以探测和鉴定布氏杆菌。尽管布氏杆菌种内DNA具有很高的同源性，分子生物学方法(包括PCR、RFLP、Southern blotting)已经发展起来，在一定程度上，能检测布氏杆菌种与种之间甚至型与型之间的差异。脉冲凝胶电泳可以区分某些布氏杆菌种的差异。但这些方法没有经过充分评价并标准化。
